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编号：002 编号：002 编编号号：：000022 技术资料 革兰氏染色操作方法 技术资料 革兰氏染色操作方法 技技术术资资料料 革革兰兰氏氏染染色色操操作作方方法法 1、准备好革兰氏染色所需试剂、玻片、吸水纸、镊子、接种环、废液缸、洗瓶、去离子水、 酒精灯等，待检测的菌株一般应为新鲜的培养物。 2、以酒精擦拭玻片，在酒精灯上干燥后，用接种环挑取一环灭菌的去离子水或生理盐水到载 玻片上，挑取少量纯培养物在水滴上涂抺至均匀分散，将涂片在酒精灯火焰上灭活、固定。 3、滴加结晶紫染色液 1-2 滴，染 1 分钟，用去离子水轻轻从培养物上方流过水洗。 广东环凯微生物科技有限公司 地址：广州市科学城神舟路788号 邮编：510663 传真：0208619 销售热线：0208602，8611（分机） 技术热线：0208877、8876（分机） 4、待干，滴加革兰氏碘液，作用 1 分钟，用去离子水轻轻从培养物上方流过水洗。 5、滴洗脱色剂（95%酒精），不时摇动玻片，直至无紫色脱落为止（约 10～20 秒），用去离 子水轻轻从培养物上方流过水洗。 6、待干，滴加沙黄复染液，复染 30 秒。用去离子轻轻从培养物上方流过水洗，待玻片干燥 后镜检。 广东环凯微生物科技有限公司 2 地址：广州市科学城神舟路788号 邮编：510663 传真：0208619 销售热线：0208602，8611（分机） 技术热线：0208877（分机） 7、油镜镜检。菌体呈紫色者为革兰氏阳性菌；呈红色者为革兰氏阴性菌。 革兰氏阳性球菌 革兰氏阴性杆菌 8、注意事项 （1）培养物要新鲜，以免对结果的判断造成影响。 （2）产品如出现沉淀，是因为结晶紫与草酸铵混合之后长时间所致，应重新购买染色液。 （3）酒精洗脱为关键步骤，不可长时间洗脱，以免造对结果判断造成影响。 （4）碘液容易挥发，使用时取适量倒进滴瓶中。平时应拧紧瓶盖、避光保存。 （5）涂片可以采用自然风干、干燥箱等方法进行干燥。 （6）每一步水洗时，注意不要直接对着涂片冲洗，水流应从上方流经涂片，轻轻水洗。 广东环凯微生物科技有限公司 3 地址：广州市科学城神舟路788号 邮编：510663 传真：0208619 销售热线：0208602，8611（分机） 技术热线：0208877（分机）