生化大实验生技实验.pptVIP

实验二、微生物的分离培养 一、目的要求 1. 掌握细菌的纯种分离技术 2. 掌握不同培养基的细菌纯种接种技术 3.了解微生物分离纯化的原理 二、实验内容及原理 （一）接种工具 （二） 微生物的分离纯种技术 平板划线分离法 通过划线，将混杂的细菌在平板表面逐一分散，经培养后，各自形成菌落(colony)。根据菌落形态、特征挑选单个菌落，移种培养后，即得到纯种细菌，从而达到分离纯化的目的 常用的划线方法有两种：分区划线法和平行划线法（连续划线法） 1、分区划线法 用途：主要用于杂菌较多的标本。 菌种：混合菌悬液 方法：用接种环以无菌操作挑取菌种，先在平板培养基的一边作第一次平行划线3～4条，再转动培养皿约70度，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分作第二次平行划线，再用同样的方法通过第二次划线部分作第三次划线和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线。划线完毕后，盖上培养皿盖， 37℃倒置培养。 2、平行划线法（连续划线法） 用途：主要用于杂菌不多的标本 菌种：混合菌悬液 方法：接种环取菌种后在平板培养基上从涂有细菌处开始做连续平行划线，划线完毕后，盖上培养皿盖， 37℃倒置培养。 （三）纯种接种培养 1、斜面接种 用途：保存菌种 分类：点种、中央划线、稀波状蜿蜒划线、密波状 蜿蜒划线、分段划线、纵向划线、挖块接种等。 菌种：大肠杆菌、表皮葡萄球菌 方法：用接种环挑取少量菌苔，移入斜面培养基管中，自斜面底部表面向上划一直线，再自底部自下而上蜿蜒划线，取出接种环灭菌后放回，培养基管口烧灼后盖回盖子。做好标记，放到试管架上，37℃培养24h后，观察结果。 2、平板密集划线 用途：增菌 菌种：大肠杆菌、表皮葡萄球菌 方法：用接种环无菌操作取菌种，先在平皿中心 划一“十”字，然后平行密集划线划满平板后转60度，重复平行密集划线，转60°，再重复平行密 集划线 。做好标记，37℃倒置培养24h，观察结果。 3、液体接种 用途：增菌 菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌 方法：用接种环挑取少量菌苔，移入液体培养基中，将带菌种的接种环在接近液面的器壁上轻轻摩擦使菌苔分散，取出接种环灭菌后放回，培养基管口烧灼后盖回盖子，轻轻摇动使菌种均匀分散在液体培养基中。做好标记，37℃培养24h，观察结果。 4、半固体穿刺接种 用途：用来观察细菌的运动性，作为鉴定细菌的特性之一 菌种：表皮葡萄球菌、甲型副伤寒杆菌 方法：用接种针挑取少量菌苔，移入半固体培养基管中，垂直刺入半固体琼脂培养基的中心，可刺到接近管底处，但不到管底，然后接种针循原路退出，接种针灭菌后放回，培养基管口烧灼后盖回盖子。做好标记，置试管架上，37℃培养24h，观察结果。 三、实验器材 1. 菌种：混合菌悬液，大肠杆菌、表葡、枯草芽孢杆菌、甲型副伤寒杆菌 2. 培养基：固体平板、液体培养基、斜面、半固体。 3. 其它：接种环、接种针、酒精灯、无菌平板等 四、本次实验内容 1. 倒平板：溶化培养基冷却至50℃左右，倒平板，待凝固后备用。 2、分区划线接种：（1人1块） 菌种：混合菌悬液 3、平行划线接种：（1人1块） 菌种：混合菌悬液 4、密集划线接种：（1人1块） 菌种：大肠杆菌、表皮葡萄球菌 5、斜面接种： （1人1块） 菌种：大肠杆菌、表皮葡萄球菌 6、液体接种：（1人1块） 菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌 7、半固体穿刺接种：（1人1块） 菌种：表皮葡萄球菌、甲型副伤寒杆菌 五、实验结果与讨论 1.固体培养基上菌落的观察并绘图记录 2.液体培养基中细菌生长的观察并绘图记录 浑浊生长；菌膜生长；沉淀生长 3.半固体培养基中细菌的观察细菌的生长现象 4.斜面培养基中细菌的观察并绘图记录 细菌的生长现象 思考题 什么叫无菌操作？ 为什么要把培养皿倒置培养？ 接种前和接种后为什么要灼烧接种环？ 为什么要接种环冷却后才能用其与菌种接触？是否可以将接种环放在台子上待其冷却？你怎样才能知道它是否已经冷却？ 在液体培养基中有哪些生长现象？举例说明 * * 1、接种环:用于细菌和酵母菌的接种 接种针：用于半固体培养基穿刺接种 镍铬丝 2、刻度吸管：主要用于接种液体培养物 10ml移液管 1ml移液管 毛细吸管 实验室中常用的吸管 3、玻璃涂布棒：主要用于分离或微生物计数时的平板涂抹。 接种工具在使用前后都应该进行灭菌！ 1、平板划线分离法 2、稀释涂布法 A 分区划线法 B 平行划线法（连续划线法） 3、倾注平板法 1 2 3 4 实验结果 培养后 培养后 实验结果 1、斜面接种 2、平板密集划线 3、液体接种 4、半固体穿刺接种 1、固体培养物接种到液体 2、液体培养物接种到液体培养：直接用移液