高通量测序基础知识简介.PDFVIP

高通量测序基础知识简介 陆桂 什么是高通量测序？ 高通量测序技术（High-throughput sequencing ，HTS）是对传统Sanger 测序（称为一代测序 技术）革命性的改变,一次对几十万到几百万条核酸分子进行序列测定, 因此在有些文献中称 其为下一代测序技术(next generation sequencing，NGS )足见其划时代的改变, 同时高通量测 序使得对一个物种的转录组和基因组进行细致全貌的分析成为可能, 所以又被称为深度测序 (Deep sequencing) 。 什么是Sanger 法测序（一代测序） Sanger 法测序利用一种 DNA 聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物。直到掺入一种链 终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成，每个反应含有所有四种脱氧 核苷酸三磷酸(dNTP)，并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP 缺 乏延伸所需要的3-OH 基团，使延长的寡聚核苷酸选择性地在G、A 、T 或C 处终止。终止点 由反应中相应的双脱氧而定。每一种dNTPs 和ddNTPs 的相对浓度可以调整，使反应得到一 组长几百至几千碱基的链终止产物。它们具有共同