用盐酸标准溶液滴定指示剂.PPTVIP

Determination of protein and amino acid in Food 第一节 概述 ?1.蛋白质的元素组成（The elements of protein） C：50-55% N：15-18% O：20-23% H：6-8% S：0-4% 微量元素：P、Fe、Zn、Cu 2、基本结构单位：氨基酸 3、蛋白质的变性作用。 4、蛋白质分析的重要性 生物活性测定 功能性质调查 营养标签 总蛋白质含量 氨基酸组成 蛋白质的营养价值 5、蛋白质的测定方法 利用蛋白质共性的方法 利用特定氨基酸残基法 第二节 蛋白质的定性测定 一、蛋白质的一般显色反应 电泳或纸层析之后用一些染料与蛋白质结合并变色。书中列举了 5 种染料。 二、复合蛋白质的显色反应 （一）糖蛋白的显色（3种方法） （二）脂蛋白的显色（2种方法） 第三节 蛋白质的定量测定 一、凯氏定氮法 常量凯氏定氮法 1. 原理 样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出，而样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵。然后加碱蒸馏，使氨蒸出。 整个过程分三步：消化、蒸馏、吸收与滴定 ① 消化 ② 蒸馏 NH4+ + OH- 影响氨化完全和速度的因素 （1）K氏烧瓶和取样量 （2）分解剂 1g样品??? K2SO4：? H2SO4 = 7g : 12ml 还有一种比例：?K2SO4： H2SO4 = 10g : 20ml ③ 吸收与滴定 现测定某一种食品的蛋白质的含量， 这种样品含有大量的脂肪，样品经过处理 后加入浓硫酸，为了使浓硫酸与样品充分 结合，经振摇后大火加热进行消化；消化 2h后，估计消化完全，取出消化液加入少 量NaOH进行蒸馏，硼酸（加入了指示剂甲 基红-溴甲基酚绿）作为吸收液，最后对 吸收液进行滴定。 计 算 X = 二、双缩脲法 操作方法 1、制作标准曲线 取10支干试管分成两组，按下表平行操作： 3、计算 取两组测定的平均值计算： Y为标准曲线查得蛋白质得浓度（mg/ml） N为稀释倍数 c为样品原浓度（mg/ml）。 ? 福林-酚法（双缩脲法的发展） 两步反应 杜马斯法（燃烧法） 样品在高温下（700-800℃）燃烧，释放的氮气由带热导检测器（TCD)的气相色谱仪测定。测得的含氮量转换成样品中的蛋白质含量。 几种蛋白质测定方法比较 其他方法 采用凯氏定氮法测一样品的粗蛋白含量，根据下列记录的数据计算： 水份含量=8.0%，1 号样品重量=1.015g，2号样品重量=1.025g，用于滴定的标准HCl浓度=0.1142mol/L，1号样品所用的HCl溶液的毫升数=22.0mL，2号样品的HCl溶液的毫升数=22.5mL，空白的HCl溶液的毫升数=0.2mL，分别以样品的干基和湿基计算粗蛋白质含量，假定该蛋白质含有17.5%的氮。 第四节 氨基酸定量测定 一、甲醛滴定法 氨基酸本身有碱性-NH2基，又有酸性-COOH基，成中性内盐，加入甲醛溶液后，与-NH2结合，碱性消失，再用强碱来滴定-COOH基。 双指示剂：百里酚酞+中性红指示剂 二、非水溶液滴定法 在水溶液中 1、能溶解的物质有限，尤其是有机物质 2、水的两性太强，能在水中滴定酸、碱范围较窄 3、本身会与水起反应而生成酸的某些物质不能滴定。 溶剂选择原则 1、不引起副反应 2、溶剂应能溶解试样及滴定反应产物 3、应考虑溶剂的酸碱性 对于酸的滴定，溶剂的酸性应越弱越好 氨基酸的非水溶液滴定 1、选择冰乙酸作为溶剂 三、电位滴定法 根据氨基的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使羧基显示酸性，将酸度计的玻璃电极和甘汞电极同时插入被测液中构成电池，用NaOH 标准溶液滴定，根据酸度计指示的pH 值判断和控制滴定的终点。 在测定某厂酱油氨基酸态氮含量时，酱油5mg于100mL 容量瓶中，加水定容，混匀后吸取此液20mL进行测定，用 0.05N氢氧化钠滴定至pH值为8.2时，消耗标准碱液7.0mL, 加入10.0mL甲醛溶液，混匀。用标准溶液继续滴定至pH9.2 时，消耗标准碱液10.12mL,同法作空白实验，滴定至pH值 为8.2时，消耗标准碱液0.08mL, 加入甲醛后滴定至pH9.2 时，消耗标准碱液0.90ml。问该样品的氨基酸态氮含量？ 2、选择高氯酸进行滴定 pH 8.2 9.2 氨基酸自动分析仪法 0.301% 你 算 对 了 吗？ * * 第九章 蛋白质及氨基酸的测定 凯氏定氮法 杜马斯法 福林酚法