防止蛀牙產品開發幻灯片课件.pptVIP

* * 蛀牙的元兇與形成原因 ↓ Streptococcus mutans 齟齒(轉糖)鏈球菌 ↓ 利用葡萄糖傳遞酵素分解蔗糖 合成黏性 a-1,3-葡萄聚醣 ↓ 吸引許多菌株共同形成牙菌斑 菌株分泌酸性物質侵蝕牙齒造成蛀牙 ↓ 預防之道: 干擾或抑制 牙菌斑的形成 防治對象 Streptococcus mutans 齟齒(轉糖)鏈球菌 策略 抗生素治療 (？) 抑制a-1,3- 葡萄 聚醣生合成 水解a-1,3- 葡萄聚醣 抗體中和 菌體 （？） 不同策略可能的執行方案與可能遭遇的困難 抗生素治療 此細菌非生長於微血管可到達之組織或器官，口服或注射抗生素可以無法直接接觸到菌體 製成口含錠的抗生素？ 具有a-1,3-葡萄聚醣保護菌體，抗生素不易達到抑菌效果 抗體中和 抗體專一性與菌體結合，透過吞嚥或飲食將菌體帶離口腔 以細胞外何種蛋白質製成抗體？ 抗體結合力足夠帶離菌體嗎？ 如何篩選a-1,3-葡萄聚醣水解酵素? 篩選可分解a-1,3-葡萄聚醣的菌株 ↓ a-1,3-葡萄聚醣來源？ ↓ Aspergillus niger 黑麴菌細胞壁 以葡萄糖傳遞酵素合成 a-1,3-葡萄聚醣 ↓ 篩選在培養皿可形成澄清環菌落（？） Enrichment medium ↓ 純化a-1,3-葡萄聚醣水解酵素 ↓ 酵素生化特性分析、生物活性分析 圖: 標準菌株Bacillus circulans WL-12之b-1,3-葡萄聚醣水解酵素 基因選殖於大腸桿菌中在活性培養基的表現 a-1,3-葡萄聚醣水解酵素基因選殖 ↓ 建構基因庫 ↓ 培養皿篩選可形成澄清環基因轉形株(?) ↓ DNA定序確認 ↓ 構築酵素大量表現質體 ↓ 純化a-1,3-葡萄聚醣水解酵素 ↓ 酵素生化特性分析、生物活性分析 a-1,3-葡萄聚醣水解酵素 ↓ N端定序（？）（以蛋白酶水解成多片段做N端定序） ↓ 純化蛋白質送MALDI-TOF Mass or Tandem Mass ↓ 設計degenernal primers ↓ 構築酵素大量表現質體 ↓ 純化a-1,3-葡萄聚醣水解酵素 ↓ 酵素生化特性分析、生物活性分析 質譜術 質譜儀 化學分子離子化 ↓ 帶電荷 ↓ 外加電場(動能) ↓ 真空管中飛行 ↓ 撞擊偵測標靶產生訊號 (質量愈大飛行速度越慢) 飛行時間質譜儀 MALDI-TOF MS Tandem Mass 串連（陣列）質譜儀 分析蛋白質種類的方法 二維電泳 胰蛋白酶切 質譜儀分析 資料庫比對 利用氣體分子撞擊胺基酸片段 研究蛋白質體學的新興技術 成本高 普及率低 遺傳密碼 N A, T, C, G V A, G, C H A, T, C D A, T, G, B T, G, C W A, T R A, G M A, C K T, G Y T, C S G, C 混合核酸對照表 實作練習 N端定序序列為 M T L S S G K S N R 請寫所設計之primers序列 另一股 primer? PCR產物不是全長open reading frame Eukaryote: 5, 3 Rapid Amplification of cDNA Ends (RACE) Prokaryote ? / mRNA separation method Synthesis cDNA Cloning full-length cDNA molecular Vector system Host cell Insert capacity (kb) Plasmid E. coli 0.1 ~ 10 Bacteriophage λ λ / E. coli 10 ~ 20 Cosmid E. coli 35 ~ 45 Bacteriophage P1 E. coli 80 ~ 100 BAC E. coli 50 ~ 300 p1 Bacteriophage-derived artificial chromosome E. coli 100 ~ 300 Yeast artificial chromosome Yeast 100 ~ 2000 Human artificial chromosome Cultured human cells 2000 * * *