氯苯降解菌CB2的降解特性及质粒特性的研究.pdfVIP

摘要 本实验从大连瑞泽农药公司的废水中筛选到了一株氯苯高效降解菌，并对其进行了 菌种鉴定、生长曲线测定、抗性及最佳降解条件测定，同时对菌株质粒的提取、质粒的 消除及质粒消除后菌株的降解特性进行了探究。主要实验结果如下： (一)氯苯降解菌的降解特性研究 l、菌种的分离和鉴定 实验筛选到一株氯苯高效降解菌，该菌株能够以氯苯为唯一碳源进行生长。运用扫 对链霉素不敏感，具有抗性，而对实验中所选用的其他抗生素都比较敏感，不具有抗性。 2、氯苯降解菌CB一2最佳降解条件 氯苯降解菌CB一2降解氯苯的最佳条件为：底物浓度120 mg／L，pH7．0，温度30℃， 摇床转速120rpm，接种量为5％。在上述最适培养条件下，该菌株对氯苯降解率可达75％。 (--)氯苯降解菌CB一2的质粒特性的研究 1、质粒提取 对于野生菌株需要选择合适的方法进行质粒提取，实验采用了碱裂解法、煮沸法和 SDS法三种方法进行质粒提取，结果显示，SDS法提取效果最好，所得到的质粒带与检测 到的质粒带结果一致，质粒的大小约为23kb。SDS法是一种相对比较温和的质粒提取方 法，适合于大质粒的提取。煮沸法的操作虽然快捷，但反应剧烈，对大质粒的破坏相当 严重，所以实验中没有提取到质粒；常规碱裂解法对质粒也有不同程度的损坏，提取到的 质粒浓度不高，效果也不理想。 2、质粒消除 为了考察质粒的功能，本文采用了吖啶橙、SDS和苯甲酸钠三种消除剂进行质粒消 除。结果表明SDS可以消除质粒，质粒消除后的菌株在氯苯无机盐培养基上难以生长。 而苯甲酸钠和吖啶橙质粒消除效果不好。 3、质粒消除后菌株的降解特性 经SDS质粒消除后的氯苯降解菌CB-2对氯苯的耐受力和降解率明显下降，这表明 该质粒与氯苯的降解代谢过程有关，其降解基因在质粒上，随着质粒的消除，其利用氯苯 的性能也丢失。通过对质粒消除后菌株对抗生素抗性的检测，发现菌株对抗生素的抗性 没有变化，该质粒与菌株抗生素的抗性没有关系。 4、质粒转化 为进一步确认该质粒携带有降解氯苯的基因，本实验将质粒转化到Ecoll中，转化 子能够在以氯苯为唯一碳源的无机盐培养基上生长，且能够降解氯苯，证明该质粒上携 带有氯苯降解性基因。 关键词：氯苯降解菌CB-2；氯苯的降解；降解性质粒 Abstract strain A effective isselectedfromthewastewater．It highly chlorobenzene-degrading was identifiedasenterobactor．Thestrainisstudiedonthe primarily of 1 of elimination characteristic degradationconditions， pasmid,degeneration strains． eliminated-plasmid characteristicof strain (一)Degenerationchlorobenzene—degrading and ofthestrain 1、Separation appraisal Astrainthathada to chlorobenzenewasisolatedfromthewaste capabilitydegrade water straincoulduse asthesolecarbon sample．111e chlorobenzene