婴幼儿食品和乳品中β-胡萝卜素的测定-北京东西分析仪器有限公司.PDFVIP

北京东西分析仪器有限公司 婴幼儿食品和乳品中β--胡萝卜素的测定-- 一、方法提要 β-胡萝卜素是一种天然色素，有多种异构体和衍生物，其中在 分子结构中含有β-紫罗宁残基的类胡萝卜素，在人体内可转化为维 生素A，称为维生素A 源。它是人体重要的营养素，常用做食品着 色剂、营养加强剂而添加于食品中。它还是一种有效的生物抗氧剂 能 淬灭单线态氧 捕获体内自由基，减少机体的氧化损伤。 本实验根据《食品安全国家标准—婴幼儿食品和乳品中β-胡萝 卜素的测定》中提供的方法对婴幼儿奶粉中的β-胡萝卜素进行测定。 试样经皂化后，使β-胡萝卜素完全变为游离态。用石油醚萃取后， 反相色谱法分离，外标法定量。 二、试剂及标准溶液配制 2.1 试剂 2.1.1 无水硫酸钠（NaSO）。 2 4 2.1.2 抗坏血酸(CHO)。 6 8 6 2.1.3 石油醚：沸程 30 ℃～60 ℃。 2.1.4 甲醇(CHO)：色谱纯。4 2.1.5 乙腈(CHN)：色谱纯。 2 3 2.1.6 三氯甲烷(CHCl)：色谱纯。3 2.1.7 正己烷(CH )：色谱纯。 6 14 2.1.8 乙醇：体积分数为 95 %。 2.1.9 氢氧化钾溶液：称固体氢氧化钾 250 g，加入200 mL 去离子水溶解。临 用前配制。 2.1.10 β-胡萝卜素标准品。 北京东西分析仪器有限公司 2.2 β-胡萝卜素标准溶液的配制 2.2.1 β-胡萝卜素标准储备液（500 μg/mL）：准确称取 β-胡萝卜素标准品 50 mg（精确到 0.1mg），用正己烷定容至 100 mL 棕色容量瓶中。 （注：β-胡萝卜素标准储备液需要-10 ℃以下避光储存，使用期限不超过3个月。标准储 备液配制后需要校正，具体操作如下： 取β-胡萝卜素标准储备液（浓度为500 μg/mL）10 μL，注入含3.0 mL正己烷的比 色皿中，混匀。测定其吸光值，比色杯厚度为1cm，以正己烷为空白，入射光波长为450nm， 平行测定3次，取均值。 按下式计算溶液浓度： A 3.01 X= × E 0.01 式中： X——β-胡萝卜素溶液浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； A——β-胡萝卜素的紫外吸光值； E——β-胡萝卜素在正己烷溶液中，入射光波长为450 nm，比色杯厚度为1 cm，溶液 浓度为1 mg/L的吸光系数为0.2638； 3.01 ——测定过程中稀释倍数的换算系数。 ） 0.01 2.2.2 β-胡萝卜素标准中间液（100 μg/mL）：从 β-胡萝卜素标准储备液（5 μg/mL）中准确移取 10.0 mL溶液于 50 mL 棕色容量瓶中，用正己烷定容至 刻度。 2.2.3 β-胡萝卜素标准工作液：从 β-胡萝卜素标准中间液（100 μg/mL）中 分别准确移取 0.50、1.00、1.50、2.00、2.50 mL 溶液转入5 个50 mL 棕色 容量瓶中，用正己烷定容至刻度，得到浓度为 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 μg/mL 的系列标准工作液。 三、仪器及工作条件 3.1仪器 3.1仪器 33..11仪仪器器 3.1.1LC 5500高效液相色谱（HPLC）仪：配有紫外检测器（北东西分析仪器有 限公司）。 3.1.2 旋转蒸发器。 3.1.3 恒温磁力搅拌器：20 ℃～80 ℃。 北京东西分析仪器有限公司 3.1.4 离心机：转速≥5000 转/分钟。 3.1.5 氮吹仪。 3.1.6 涡旋混合器：（QL-901）。 3.1.7 分析天平：感量为0.0001 g（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。 3.1.8 滤膜：0.45 μm。 3.2色谱条件 色谱柱：C18反相色谱柱（粒径 5 μm，250 mm×4.6 mm）或同等性能色谱柱。 流