细胞工程第六章植物原生质体培养和体细胞杂交(2294KB).pptVIP

(2)非对称融合 非对称融合(asymmetric fusion)是指利用物理或化学方法使某亲本细胞的核或细胞质失活后再进行融合。 非对称融合示意图 二、体细胞杂交 (一)原生质体融合 原生质体融合，也称体细胞杂交，就是使分离下来的不同亲本的原生质体，在人工控制条件下，像性细胞受精作用那样互相融合成一体。 (二)原生质体融合的方法及过程 1．无机盐诱导融合 利用硝酸钠的作用是中和质膜的负电荷，使原生质体间不再彼此相互排斥，而紧密地结合在一起。 2．聚乙二醇(PEG)与高pH-高钙相结合的诱导融合 融合的特点：其优点是融合成本低，勿需特殊设备；融合子产生的异核率较高；融合过程不受物种限制。其缺点是融合过程繁琐，PEG可能对细胞有毒害。 PEG的作用机理： Kao等认为，由于PEG分子具有轻微的负极性，故可以与具有正极性基团的水、蛋白质和碳水化合物等形成H键，从而在在原生质体之间形成分子桥，其结果是使原生质体发生粘连进而促使原生质体的融合；另外，PEG能增加类脂膜的流动性，也使原生质体的核、细胞器发生融合成为可能。 融合技术要点：融合液：CaCl2?2H2O 8~10mmolKH2PO4 0.7mmol甘露醇或山梨醇 0.5~1.0molpH 5.6诱导液：融合液＋PEG 20～45％稀释液：A液（g/100ml）pH6.0 B液（g/100