双硫键的定位.PPT

若欲定序整條多肽，最常被使用的化學性方法，是由 Pehr Edman 所開發出來的。 艾德曼降解法（Edman degradation）只會對胜肽之胺基端殘基加以標定並移除之，其餘所有肽鍵仍均保持完整（圖3-25b）。 目前艾德曼降解法可在一種稱為蛋白質定序儀（sequenator） 上進行，機器會將各步驟所需試劑以正確比例確實混勻、分離且決定產物，並記錄結果。 利用艾德曼降解法準確定序之多肽長度是由每個個別化學步驟的效率決定的。 p.97 p.97 圖3-25 大分子蛋白質須先經片段化後始能完成定序 胺基酸定序之效率通常隨著多肽長度增加而遞減。 蛋白質中非常長的多肽必須先打斷成小片段後才能有效地進行定序。 蛋白質會先以化學或酵素方法切割成數個特定的片段。如果有雙硫鍵存在，必須先將其打開。 每個片段都需分別純化後再以艾德曼降解法進行定序。最後，各片段出現在原始蛋白質中之順序將排列好，並決定出雙硫鍵所在之位置。 p.98 打斷雙硫鍵 雙硫鍵的存在會干擾定序的進行。 雙硫鍵也會干擾多肽以化學或酵素方法切割的過程。兩種將雙硫鍵不可逆打斷的方法如圖 3-26 所示。 p.98 FIGURE 1-13 p.98 圖3-26 FIGURE 1-13 p.98 圖3-26　打斷蛋白質中之雙硫鍵。圖中所示為兩種常用的方法：以過氧甲酸處理可將胱胺