纤维素柱层析.PPT

糖模块的总结  二、与糖有关的实验的拓展 糖生物学被称为继核酸蛋白质之后的第二里程碑，其反馈的生物信息却远远大于核酸和蛋白质，其重要性涉及到受体、供体、信号传导、免疫、生物合成代谢等生物学重要问题，所以我们虽然学习了糖的一个系统性实验，这个系统的取材是淀粉丰富的材料甘薯，是多糖，含葡萄糖，而生物学中的许多内容与生物研究有关热点是糖蛋白，其种类繁多，组成复杂，所以所学习的系统表现出简单化的局限性。因此同学们会问：糖蛋白中的寡糖和糖链是怎样分离纯化的？其设计原理是什么？ 分离纯化程序图： （一）糖蛋白中寡糖和糖链的分离纯化 —— 高等动、植物，微生物，地衣海藻等材料 醇、醚回流脱脂 （冷水，热水，碱性水，酸性水）水抽提（含有许多杂物质，如无机盐，低分子和大分子有机物） 分 离 离子交换、凝胶过滤、透析（去掉小分子） 蛋白酶，木质素酶等 酶解（去掉原有大分子蛋白） —— 氯仿或三氟三氯乙酸振荡（得水相，去蛋白） 分部沉淀法 盐析 金属络合法 纤维素柱层析 凝胶层析 离子交换层析 加30%醇或酮 得沉淀物（大分子糖组分） 溶液相 纯 化 加50%醇或酮 得沉淀物（中等分子组分糖） 溶液相 加更高浓度的醇或酮 得沉淀物（小分子组分糖） 废液 —— 盐析：不同糖在不同盐浓度中具有不同溶解度而逐步析出，如NaCl，KCl，（NH4）2SO4等，后者最佳。 金属络合法：有些多糖能与铜、钙、钡等络合而沉淀，得到纯化物应该是盐类。 纤维素柱层析：多糖混合物用4倍体积乙醇全部沉淀于惰性多孔的纤维素柱上面，然后用由高到低的不同浓度的乙醇洗脱，则不同多糖按小分子组分到大分子组分的顺序被洗脱出来。 上述各种纯化方法可以灵活、交替使用，以求获得单组分的样品。 （二）有了纯化的单组分的糖，我们可以研究组分中单糖的组成，常用的方法有： 1、纸层析：展层剂常用的是： 正丁醇：乙酸：水 为4：1：5，用上层。该展层剂可把葡萄糖，半乳糖，甘露糖，木糖，L-岩藻糖，葡萄糖醛酸，氨基葡萄糖及氨基半乳糖依迁移率的不同而分布在滤纸的不同的位置，而同时用已知单糖点样，层析为参比，即可分析出某组分的糖组成。（示范操作过程及结