原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
水稻种子总淀粉含量的测定-bio-protocol
/e1010161 DOI:10.21769/BioProtoc.1010161
水稻种子总淀粉含量的测定
李一博*，彭波
作物遗传改良国家重点实验室，华中农业大学，武汉
*通讯作者邮箱：liyibo@
引用格式：李一博, 彭波. (2018). 水稻种子总淀粉含量的测定. Bio-101 e1010161. Doi:
10.21769/BioProtoc.1010161.
实验原理：二硝基水杨酸法是利用碱性条件下，二硝基水杨酸(Dinitrosalicylic acid, DNS)
与还原糖发生氧化还原反应，生成3-氨基-5-硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色，
且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理，用比色法测定还原糖含
量的，进而计算出淀粉的含量。因其显色的深浅只与糖类游离出还原基团的数量有关，
而对还原糖的种类没有选择性，故 DNS 方法适合用在多糖 (如纤维素、半纤维素和淀
粉等) 水解产生的多种还原糖体系中。
实验目的：检测水稻种子或者别的组织中还原糖含量，进而测定其中总淀粉的含量。
关键词：水稻，种子，淀粉含量，测定
材料与试剂
1. 牙签
2. 10 ml 离心管
3. 各种型号的吸头
4. 200 目筛子
5. 水稻种子
6. 葡萄糖苷酶 (Amyloglucosidase, Sigma, catalog number: A7095, USA)
7. pH 试纸 (Sigma, catalog number: 010B164536, USA)
8. 3,5-二硝基水杨酸 (DNS) (Sigma, catalog number: G0550, USA)
9. 浓盐酸 (国药试剂，分析纯)
10. NaAc (国药试剂，分析纯)
11. KOH (国药试剂，分析纯)
Copyright © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC. 1
/e1010161 DOI:10.21769/BioProtoc.1010161
12. NaOH (国药试剂，分析纯)
13. D 型无水葡萄糖 (国药试剂，分析纯)
14. Na SO (国药试剂，分析纯)
2 3
15. 重蒸酚 (国药试剂，分析纯)
16. 酒石酸钾钠 (国药试剂，分析纯)
17. 0.4 mol·L-1 醋酸钠缓冲液 (pH = 4.75)
18. DNS 试剂 (见溶液配方)
仪器设备
1. 移液器
2. 棕色试剂瓶
3. 离心机 (Eppendorf, model: centrifuge 5417R, USA)
4. 恒温摇床 (HDL，哈尔滨市东联电子技术开发有限公司)
5. 旋风式粉碎机 (Udy corporation, Colorado, USA)
6. 精米机 (JMJ-100 型，铁岭精泰制米机械股份有限公司)
7. 电子天平 (OHAUS, USA)
8. 稻谷出糙机 (JLGJ4.5 ，台州市粮仪厂)
9. 涡旋振荡器 (敖然科技有限公司)
10. 水浴锅 (武汉金宝华科技有限公司)
11. 酶标仪 (TECAN Infinite M200)
12. 酶标板 (Nunclon 96 Flat Transparent)
实验步骤
1. 水稻种子成熟收获后晒干或者烘干，然后将种子进行脱粒处理。
2. 种子在室温保存3 个月后利用稻谷垄谷机上脱壳得到糙米。
3. 将糙米在精米机上粉碎成精米。
4. 精米在旋风式粉碎机上粉碎成米粉。
5. DNS 试剂的制备 (见溶液配方1)。
6. 样品葡萄糖的制备：称取过200 目筛子的米粉样品50 mg (4 个空白对照各加50 μl
Copyright © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC. 2
/e1010161 DOI:10.21769/BioProtoc.1010161
蒸馏水) 于10 ml 离心管中，用枪迅速加入6 ml 2.5 mol·L-1 KOH(40 °C)，加牙签
后在室温
文档评论（0）