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凝胶净化-高效液相色谱检测食用油中苯并[a]芘 北京莱伯泰科仪器有限公司 前言： 苯并[a]芘（benzo[a]pyrene）是一种含有五个环的多环芳烃，被国际癌症研究机构列为Ⅰ类致癌物质。 泵并[a]芘可以通过加工过程、原料污染以及环境污染等进入食品当中，另外在食品的加工过程中，例如熏 烤、烘焙、烹炸等过程中均可能导致苯并[a]芘的产生。世界各国都对食用油脂中苯并[a]芘的含量做出了 最大残留限量。 本文采用凝胶净化系统对食用油样品进行净化，采用 C18 柱进行高效液相色谱分离，以荧光检测器进 行检测，测定中食用油中苯并[a]芘的含量，方法操作简单，稳定性好。 1、 实验部分： 1.1仪器与试剂 PrepElite GV全自动凝胶净化-定量浓缩系统（莱伯泰科有限公司，美国波士顿） LC600二元高压梯度高效液相色谱系统（配荧光检测器）（北京莱伯泰科仪器有限公司，北京） 甲醇中苯并[a]芘溶液标准物质（北京恒元启天化工技术研究院） 乙酸乙酯（A.R 北京试剂公司，重新蒸馏后使用） 环己烷（A.R 北京试剂公司，重新蒸馏后使用） 乙腈（色谱纯） 甲醇（A.R 北京试剂公司，重新蒸馏后使用） 1.2样品处理 1.2.1样品提取 称取食用油样品0.8于5ml 容量瓶中，用乙酸乙酯：环己烷（1+1）溶解，定容。 1.2.2样品净化 将上述处理好的样品装入 PrepElite GV 全自动凝胶净化-定量浓缩系统的进样瓶中，并放置在液体处 理器的样品架上，设置凝胶净化条件如下： 流动相：乙酸乙酯：环己烷=1:1 分离柱：Bio-Rad SX-3 上样量：2mL 流 速：5ml/min 收集范围：20-28min 设置自动浓缩条件如下： 浓缩温度：40℃ 浓缩模式：溶剂置换 置换溶剂：乙腈 1.3分析条件及工作曲线建立 1.3.1色谱条件 采用高效液相色谱配荧光检测器对苯并[a]芘进行检测，色谱条件如下： 色谱柱：Labtech C18（4.6 mm X 150 mm，5um） 柱温：30℃ 流动相：乙腈 流速：1 mL/min 进样量：20 uL 激发波长：384nm 发射波长：406nm 1.3.2 标准工作液配制 苯并[a]芘标准储备溶液：准确取苯并[a]芘标准品2ml（5.16μg /ml）于50mL 容量瓶中，用甲醇溶解， 定容。此溶液含苯并[a]芘 206.4ng/mL，4℃避光保存。 标准工作液：用苯并[a]芘标准贮备溶液1ml、2.5ml、5ml、10ml、20ml于100ml容量瓶中，用乙腈定容， 得质量浓度为5.16、10.32、20.64、41.28ng/mL 的苯并[a]芘标准溶液。 2、 结果与讨论 2.1 样品前处理方法建立 因为苯并[a]芘在紫外区吸收较弱，所以本文采用作图法来确定凝胶净化系统的收集时间。从6分钟开 始，每隔4分钟收集一个组分，并对每一个组分进行HPLC-FL测试，以苯并[a]芘的峰面积为纵坐标作图 （如 图1），从而初步确定收集时间为18-30min。 然后从 18 分钟开始，每隔 2 分钟收集一个组分，并对每一个组分进行 HPLC-FL 测试，以苯并[a]芘的 峰面积为纵坐标作图（如图2），从而最终确定收集时间为20-28min。 3500000 2000000 3000000 1500000 2500000 2000000