dna聚合酶-生物化学与分子生物学.pptVIP

第十章 基因信息的传递 DNA的生物合成 复制的起始点与方向 亲代DNA开链，复制起始点呈叉型移动 复制方向 DNA合成的方向单向、双向？ Topo酶：切割DNA链，使其松弛后再连接 DNA聚合酶功能 5′?3′聚合作用 5′?3′外切酶 3′?5′外切酶活性 五、DNA连接酶(DNA ligase) 三 复制的终止 1.原核生物复制终止 2.真核生物复制终止 第五节 逆转录现象和逆转录酶 三、DNA聚合酶（DNA-pol） 即依赖于DNA的DNA聚合酶（DDDP） 真核生物有多种： DNA-pol ?、?、?、?、?… 原核生物有3种： DNA-polⅠ、 Ⅱ、 Ⅲ 5 ucgagcuag-OH 3 5 ucgagcuag DNA pol dNTP 5′?3′聚合作用 3 agctcgatcgtagcctagcgtagcagtgcacgatc 5 3 agctcgatcgtagcctagcgtagcagtgcacgatc 5 catcggatcgcatcgtcacgtgctag 3 5’ 3’ 内切酶 外切酶 外切酶与内切酶作用图解 5′?3′外切酶活性的功能 切除引物，切除突变片段 5’ 3’ 3’?5’ 外切酶活性 校 读 错配碱基 大肠杆菌三种DNA聚合酶比较 DNA 聚合酶Ⅱ 分子量 每个细胞的分子统计数 5′-3 ′聚合酶作用 3′-5 ′核酸外切酶作用 5′-3 ′核酸外切酶作用 转化率 主要功能 活性（nt/min） DNA 聚合酶Ⅰ DNA聚合酶Ⅲ （复合物） 109，000 400 + + + 1 校读,修复1000 120，000 40 + + - 0 .05 400，000 10-20 + + + 50 复制100000 特 性 不清 填补缺口 50 DNA聚合酶Ⅲ全酶 ? ? ? ? ? ? ? ? ? 核心酶 Pol III? Pol III 延长因子 DNA聚合酶Ⅲ二聚体 小片段 大片段 （Klenow fragment） 5 →3 聚合功能 3 →5 外切酶活性 5→3外切酶活性 DNA pol I 四、引物酶(Primase)和引发体 5′ 5′ 催化RNA引物合成的酶叫引物酶，它是一种特殊的RNA聚合酶 DNA合成需在RNA引物的基础上进行 RNA引物 5′ 3′ 5′ 3′ DnaA 引发体（primosome）：包括解螺旋酶 、DnaC、引物酶及DNA复制的起始区域 5′ 3′ 3′ 5′ 引物酶 DnaC 引发体 解螺旋酶 功能： 催化DNA双链的3’羟基和相邻的5’磷酸基团形成磷酸二酯键，从而把两段相邻的DNA链连成完整的链 小 结 主要成员 主要作用 DnaA 识别复制起始位点 解螺旋酶 解开DNA双链 SSB 维持已解开单链DNA的稳定 引物酶 合成RNA引物 TOPO 使打结、缠绕、正超螺旋的DNA松驰 DNA-pol Ⅲ DNA复制 DNA-polⅠ 水解引物、填补空隙、修复作用 DNA连接酶 催化双链DNA中单链缺口的连接 第三节 DNA生物合成过程 1.复制的起始 2.链的延长 3.复制的终止 DNA合成期 哺乳动物的细胞周期 一 复制的起始 (一) DNA解成单链 由特定蛋白质识别复制起始位点（ori），在解螺旋酶、TOPO酶及单链DNA结合蛋白的共同作用下，DNA解链，解旋，形成复制叉 ? 倒Y (二)引发体的生成 解旋酶解开双链后引物酶进入形成引发体 5′ 3′ 3′ 5′ 引物酶 DnaC 引发体 解旋酶 （三） RNA引物的合成 5′ 5′ RNA引物 5′ 3′ 5′ 3′ 参与复制起始的蛋白因子 名称 功能 DnaA蛋白 辨认起始点 解螺旋酶（DnaB，Rep） 解开DNA双链 DnaC 协助解螺旋酶 引物酶（DnaG） 催化RNA引物生成 SSB 稳定解开的单链 拓扑异构酶 理顺DNA链 OriC