透明质酸的生产-透明质酸钠.PDFVIP

明质酸的生产 学平 凌沛学 王春喜 张天民 透明质酸是一种酸性黏多糖，广泛存在于动物的组织细胞间质 （基质） 和某些细菌的荚膜中。1934 年Meyer 等首先从牛眼玻璃体中分离出该物质， 并命名为hyaluronic acid （HA ）。HA 由葡糖醛酸和N- 乙酰氨基葡糖组成的双 5 糖单位构建成的直链多糖，相对分子质量（ r ）为（1~10）×10 。HA 的生 产工艺主要分为两大类，以动物组织为原料的 取法和细菌发酵法。几乎所 有的动物组织中均含有HA ，只是含量不同，能够用于生产的原料主要为鸡冠 和人脐带。细菌发酵法是利用某些种属的链球菌在生长繁殖过程中，向胞外 分泌以 HA 为主要成分的荚膜。细菌发酵法与动物组织提法相比，具有生产 规模不受动物原料限制，发酵液中 HA 以游离状态存在，易于分离纯化，成 本低，易于形成规模化工业生产，无动物来源的致病病毒污染的危险等优点。 HA 无种属差异，不同动物组织提取的及不同菌种发酵生产的HA ，在化学本 质和分子结构上是一致的，只是 r 有差别。 1 以雄鸡冠为原料的生产工艺[1，2] 1.1 工艺过程[1，2] 冻鸡冠解冻后，用绞肉机绞碎，加适量水用胶体磨磨成糊状，按每 1kg 鸡冠加水8L，加氯化钠80g，搅拌加热至90 ℃，保温 10min ，冷却至50 ℃， 用1mol/L 氢氧化钠液调pH8.5~9.0，加入适量胰酶，45 ℃~50 ℃保温酶解5h~7h ， 酶解过程中维持pH8.5~9.0 。将酶解 取液用滤布加硅藻土加压过滤，得澄清 滤液。取滤液，调pH6.0~6.5，将滤液加到3 倍体积的95% 乙醇中，反复倾倒 3 次，待纤维状沉淀充分上浮后，取出沉淀，用适量乙醇脱水3~5 次，真空干 PDF created with pdfFactory trial version 燥，得HA 中间品。将HA 中间品溶于0.1mol/L 氯化钠溶液中，溶解浓度为 0.3% ，溶解过程中加少量氯仿防腐。溶解后，调pH4.5~5.0，加入等体积的氯 仿搅拌处理2 次，静置分出水相。将水相用稀氢氧化钠溶液调pH7.5，加入适 量链霉蛋白酶，37 ℃酶解24h 。酶解结束后，向酶解液中加入同体积的1%氯 化十六烷基吡啶 （CPC ）溶液，静置，收集 HA-CPC 络合沉淀。将 HA-CPC 络合沉淀加入0.4mol/L 氯化钠溶液中，搅拌解离5h~10h 。解离液先用硅藻土 过滤至清，再用0.2 μm 微孔滤膜精滤。将滤液加至3 倍体积的95% 乙醇中， 反复倾倒3 次，取出纤维状HA 沉淀，脱水，真空干燥，得药用HA 精品。 1.2 工艺说明与讨论 鸡冠绞碎后用胶体磨处理时，注意不要磨得太细，以减少机械剪切力对 HA 的降解。磨成糊状后，酶解和提取同时进行，提取效率高。提取时，在水 中加入 1%的氯化钠。加热至90 ℃可对原料有一定灭菌作用，并使蛋白质热变 性，易被蛋白酶水解。所用的蛋白水解酶为胰酶、木瓜蛋白酶、链霉蛋白酶、 中性蛋白酶、碱性蛋白酶等。 鸡冠中的 HA 与蛋白质以结合状态存在，酶 解的另一重要作用是切断 HA 与蛋白质分子的结合。提取和酶解时，应注意