目镜测微尺物镜测微尺显微镜.ppt

实验八微生物细胞大小的测定 典型大肠杆菌的大小：0.5×2um 酵母菌的大小：1-5 × 5-20um 霉菌菌丝的直径：2-10um 病毒的大小：10-300nm 一、目的要求 了解测微尺的构造、掌握其使用和计算方法。 学习并掌握微生物细胞大小的测定方法。 二、实验原理 微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。其大小的测量需要在显微镜下借助于测微尺，包括目镜测微尺和镜台测微尺。 目镜测微尺的构造和使用： 目镜测微尺是一块可被放入接目镜内的有精确的等分刻度的圆形小玻片。测量时需将其放入接目镜中的隔板上，用以测量经显微镜放大后的细胞物象。由于在使用不同的放大倍数时，细胞物象的大小不同，故目镜测微尺在不同放大倍率下每格实际代表的长度也随之变化，因此，需用物镜测微尺来校正在不同放大倍率下目镜测微尺每格所代表的实际长度。然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际大小。 物镜测微尺的构造和使用： 中央刻有精确刻度的载玻片，一般是将1 mm等分为100格，每格长0．01mm，即10 um，它不直接用于测量细胞大小，而是用于校正目镜测微尺的每格的相对长度。 目镜测微尺每格长度(um)＝ 三、实验材料 酵母菌悬液（市售的干酵母粉） 目镜测微尺，物镜测微尺 、显微镜、吸管、接种环、载玻片、吸水纸、番红染色液 （三）酵母细胞大小的测定 1、 涂片，固定：用吸管吸取1滴酵母菌悬液滴加到干净的载玻片上，用接种环涂抹均匀，在酒精灯火焰上方干燥、固定。 2、染色：滴加（1滴）番红染色液，1-2min后，水洗至流出液无色，吸水纸吸干。 3、显微镜下观察、测量：在不同倍率下测量菌体的长度和宽度，记录测定值，并计算出酵母的长、宽值。 4、显微镜复原、测微尺放回原处。 五、结果与思考题 1 . 填写实验结果：表一和表二。 五、结果与思考题 2. 为什么更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正。 3. 如何校正目镜测微尺？ 实验准备 天平、称量纸、量筒、平板计数培养基等 1. 每组配300ml平板计数培养基，分装2支三角瓶，加塞包扎待灭菌。 2. 每组洗刷培养皿10套，包扎待灭菌。 3. 每组包扎1ml吸管1支，5ml1支，10ml1支待灭菌。 * * ？ ×10 ×40 10um 四、实验步骤 （—）装目镜测微尺 （二）校正目镜测微尺 1.将物镜测微尺刻度面朝上放在显微镜载物台上 2.先用低倍镜观察，将目镜测微尺刻度与物镜测微尺的刻度平行。使两尺的第一条刻度线相重合，再寻找两尺的另一条重合的刻度线，分别记录两重合线之间物镜测微尺和目镜测微尺所占的格数，由公式计算出目镜测微尺每格所代表的长度。 3.用同样的方法换成高倍镜或油镜进行校正，记录并计算在每种倍率下目镜测微尺每一格所代表的长度。 表一 目镜测微尺校正结果 高倍镜 低倍镜 目微尺每格实际长度 物微尺格数 目微尺格数 目镜倍数 物镜倍数 接物镜 表二 酵母细胞大小测定结果 长度/um 目微尺格数 宽度/um 目微尺格数 菌体大小范围 长 宽 目微尺每格实际长度 物镜倍数