医学检验实验室基本技巧方法学验证演稿.pptVIP

A值计算 I=实验天数(通常为20天) Xi1=第i天第一批实验结果的平均值(通常重复2次) Xi2第i天第二批实验结果的平均值(通常重复2次) B值的计算 I=实验天数 Xi=第i 天全部实验结果的平均值 X=所有结果的平均值 日间方差 批间方差 总不精密度 评价测定线性范围 线性是分析方法的一个特征，不同于准确度和精密度。线性范围（linear range）是指系统最终的输出值（浓度或活性）与被分析物的浓度或活性成比例的范围。线性范围的测量既测定浓度曲线接近直线的程度，它反映整个系统的输出特性。线性检测系统反应，包括校准、线性化技术、系数和仪器反应。 一般要求 执行分析过程的试验人员必须掌握仪器操作和维护程序、标本准备方法和校准。 对较简单的设备需要5天或更少的时间，对较复杂的多通道设备需要5天或更长的时间。 在完成仪器熟悉过程后开始实验并收集数据。 实验标本 线性实验应使用与病人标本相似的标本或注明标本的基质类型，最少使用4个浓度水平，推荐5个水平。 高值标本应高于线性上限30％，低值标本应低于线性低限。 线性实验可使用的标本 混合病人血清（理想的标本基质）； 加入待测物的混合人血清，在没有干扰物存在时不需高纯度的加入品； 经过、特殊处理的混合人血清，用于降低分析物浓度，如：透析、热处理、层析； 对盐水透析过的混合人血清，在线性实验中使用此类标本可掩盖不同的基质效应； 商品质控品或校准品，此类标本由于不是正常的生理形式，可掩盖实际的线性结果； 水溶液，一般无基质效应。 实际工作中，可准备如下血清： 低浓度X1混合血清； 高浓度X5混合血清； 血清X2：3份“X1”+1份“X5”； 血清X3：2份“X1”+2份“X5”； 血清X4：1份“X1”+3份“X5”。 浓度由低到高顺序：X1, X2, X3, X4, X5 配制溶液浓度的计算 X为标本浓度，V为标本体积 实验程序 全部实验和数据采集应在同一工作日内完成。分析序列应为随机排列。有显著携带污染时，应用空白隔开标本。每个浓度标本重复测定4次纪录测定结果。 方法线性实验记录表 标本浓度 测定次数 X1 Y1-1 Y1-2 Y1-3 Y1-4 X2 Y2-1 Y2-2 Y2-3 Y2-4 X3 Y3-1 Y3-2 Y3-3 Y3-4 X4 Y4-1 Y4-2 Y4-3 Y4-4 X5 Y5-1 Y5-2 Y5-3 Y5-4 观察结果有无明显的数据错误，若有明显异常时，应判断是否为离群点。 判断离群点的方法 对于特定浓度Yi值的离群点进行检测时，需将其4个重复值从大到小排列（Yi-1到Yi-4）。 计算级差D=Yi-1－Yi-4。 若Yi-1可能是离群点，计算：D1=（Yi-1－Yi-2）/D。 若Yi-4可能是离群点，计算：D4= Yi-3－Yi-4）/D。 计算结果（D1或D4）如果大于0.765（0.05）或0.889（0.01），则该点判为离群点。 全部数据中的离群点如果有2点或以上，则应保留全部数据或重新进行实验。 离群点2个或者以内，保留全部数据。 离群点2个以上，重新实验。 数据的处理 以分析物浓度为X轴，反应值或仪器输出值（均值）为Y轴，绘制X-Y线性图（Y=aX+b）。 目测线性和进行统计学分析，判断是否符合要求。 线性分析 直线相关回归 曲线直线化 扩展试验 对于线性结果的分析，应当注意统计学标准和临床可接受限不同；应慎用方法学线性范围从0开始；有临床意义的浓度应在线性评价中，如最低线性浓度、医学决定水平及最高线性浓度。 方法学比较 实验室中使用的检测方法，随着科学技术的发展不断更新，在引进新方法前或用一种方法替代另一种方法时为保证实验室检测结果的连续性，通常要进行偏差分析，以比较不同的分析方法在测定同一分析项目时结果的差异。 标本要求 用于方法学对比实验的标本，应来源于健康人或患者，无明显干扰因素，并应尽量避免使用储存标本。 全部标本在医学决定水平范围内均匀分布，标本至少40例。 增加标本数可提高可信性。 对比方法 可采用厂家要求的实验室常规方法或公认的参考方法。 对比方法应具有好的精密度，没有已知的干扰物，与评价方法单位相同，相对国家标准或参考方法的偏差为已知。 实验程序 （1-2） 操作者应有足够的时间熟悉仪器操作、保养程序及评价方案。在全部实验过程中，都必须建立适当的质量控制程序。 进行方法学对比实验，每天应测定8份标本，每份标本都用评价方法和对比方法进行双份测定，至少连续测定5天，共40份标本。测定时先对标本排序，再按顺序1至8测定第一次，顺序8至1测定第二次。按表17-3收集数据 方法学比较实验纪录表 标本号 评价方