《高效毛细管电泳》.pptVIP

高效毛细管电泳及其在农药分析中的应用 徐娟 理学院 030360002 一、问题的提出 我国现有中药种类已达12807种，其中药用植物11146种，药用动物1581种，药用矿物80种．中草药在保护人民群众健康方面起着重要作用．由于需求量大，野生中草药远远不能满足市场的需求，目前大部分中草药都依赖人工栽培．全国药材种植面积超过580万亩，药材生产基地600多个，常年栽培的药材达200余种．为了保障种植药材的产量，药农不得不频繁地使用各种农药．农药残留不仅影响群众的健康，还影响我国名贵药材的出口创汇．如80年代末云南省出口日本的三七大量退货，目前我国人参在海外市场日益受韩国高丽参的排挤等，都有农药残留超标的原因． 三、CE的特点 高质量灵敏度：常用紫外检测器的检测限可达10-13－10-15mol，激光诱导荧光检测器(LIF)则达10-19-10-21。。 高分辨率：每米理论塔板数为几十万，高者可达几百万乃至几千万。 高速度：许多分析可在10分钟内完成，有的可在60秒内完成。 所需样品少：只需纳升(10-9升)的进样量。 成本低：只需少量(几毫升)的流动相和低廉的毛细管。 应用范围广：除分离生物大分子（肽、蛋白、DNA和糖等）外，还可用于小分子(氨基酸、药物等)及离子(无机及有机离子等)，甚至可分离各种颗粒(如硅胶颗粒等)。 四、CE的分离模式 1 毛细管区带电泳(capilary zone electrophoresis,CZE) CZE的分离机理是基于各被分离物质的净电荷与质量比(荷质比)间的差异。应用范围包括氨基酸、肽、蛋白、离子分析、对映体拆分和很多其它离子态物质的分析。 2 胶束电动色谱(micellar electrokinetic capillary chromatography，MECC) MECC是唯一既能分离中性溶质又能分离带电组分的CE模式。采用表面活性剂(如十二烷基硫酸钠，SDS)在操作缓冲液内形成有一疏水内核、外部带负电的胶束相。利用溶质具有不同的疏水性，在水相和胶束相(准固定相)间分配的差异得以分离。主要用于小分子、中性化合物，手性对映体、各种药物等。 3毛细管凝胶电泳(capillary gel electrophoresis，CGE) CGE是将凝胶移到毛细管中作支持物进行的电泳。不同体积的溶质分子在起“分子筛”作用的凝胶中电泳分离。常用于蛋白质、寡聚核苷酸、RNA、DNA片断分离和测序及PCR产物分析。现在还有采用无胶筛分方法，同样可达分离目的。 4毛细管等电聚焦(capillary isoelectric focusing，CIEF) CIEF是用两性电解质在毛细管内建立pH梯度，使各种具有不同等电点的蛋白质在电场作用下迁移到等电点的位置，形成一非常窄的聚焦区带。已成功用于测定蛋白质等电点，分离异构体或用其它方法难于分离的蛋白质。 5毛细管等速电泳(capillary isotachophoresis ，CITP) CITP采用先导电解质和尾随电解质，使溶质按其电泳淌度不同得以分离，是一种较老的方式。现在可作为柱前浓缩方法用于富集样品。 6毛细管电色谱(capillary electrochromatography，CEC) CEC是将HPLC中众多的固定相微粒填充到毛细管中，以样品与固定相之间的相互作用为分离机制，以电渗流为流动相驱动力的色谱过程。虽然柱效有所下降，但增加了选择性，是一种有发展前景的模式。 五、 在农药分析中的应用 1. 定量分析研究 2. 在农药制剂和原药中有效成分的测定 3. 在农药中杂质的分离和测定 4. 手性农药分析 六、应用实例－ 毛细管电泳法研究提取剂对黄连－黄柏共煎剂中生物碱含量的影响 样品制备 粉碎－过筛－浸泡－回流－用水提取－提取剂提取 2. 电泳分析 稳定仪器－确定检测波长－选择缓冲溶液－电泳检测 3、结果与分析 成分分析 按照图1b中所示得试验条件，采用加入法测定小檗碱等得溶液电泳图，结果见图2。1至6峰对应的化合物分别为黄连碱、小菜碱、麦小菜碱、巴马汀、药根碱、小菜红碱。与图1b的结果相比较，黄连。黄柏配伍后共煎浸膏中的主要成分为黄连碱、小果碱、麦小菜碱、巴马汀和药根碱。 线性关系 配制一系列小菜碱和巴马汀的标准混合镕液，在同一条件下测定电泳图，以峰面积对浓度作图，结果小菜碱和巴马汀分别在15.0～65.0mg／L，12.5～50.0mg/L之间有良好的线性关系，回归方程为： 小檗碱：y＝1455.3C—2134 r＝0．9984 (1) 巴马汀：y＝797．6