就是‘酶’关系—toll-likerecepetor对肠道上皮细胞乳糖酶活性之影响.pdfVIP

就是「酶」關係— Toll-like Recepetor 對腸道上皮細胞乳糖酶活性之影響 研究者：陳欣妤 簡懿姍 指導者：陳明汝教授 李宏孝老師 摘要 腸道上皮細胞表層之 Toll-Like Receptor (TLR)在近期研究中，被發現在經腸內菌刺 激後，具有啟發特殊細胞功能以及 DNA 轉錄機制，進而促使腸道內酵素之生成。另一 方面，腸內菌對乳糖分解亦有相當的影響。因此本研究欲探討 TLR 對腸道上皮細胞內乳 糖酶之影響，期能應用於改善乳糖不耐症。本計畫中以腸道上皮細胞株 Caco-2 C2BBE1 之細胞模式，藉由刺激不同 TLR ，確認各TLR 與乳糖酶活性之關聯。目前實驗顯示， TLR 受活化後乳糖酶活性普遍降低，而其中以 TLR3 受活化後之活性降低比例最為顯著。 而部分細菌，如 Lactobacillus mali 與 Vibrio vulnificus 等的作用並不會造成腸道細胞內乳 糖酶活性的改變。未來將利用 TLR 拮抗抗體或 RNA 干擾技術抑制 TLR 之活化，以驗證 乳糖酶活性降低確實受 TLR 之影響。並規劃更進一步以各種微生物(e.g.益生菌或病原菌) 刺激 TLR ，研究微生物是否能藉由TLR 調控腸道上皮細胞乳糖酶活性。 壹 、研究動機 乳糖不耐症為腸道乳醣酶之表現或活性不足，而造成乳糖代謝發生異常，產 生脹氣 、腹瀉與腹部疼痛等症狀，進而影響生活品質(Tuure and Korpela, 2004) 。許 多人長期為乳糖不耐症所困擾，其中部分為基因遺傳，無法根治，但也許能藉由 後天環境影響舒緩乳糖不耐症之症狀。市面上減輕乳糖不耐症的藥物發展已臻完 備，然而在搜尋資料的過程中，我們發現腸道內細菌對乳糖分解有相當的影響， 但其中機制卻尚未完全被釐清。另一方面，同時得知在腸道上皮組織的 TLR 於近 幾年來有特別的發現(Abreu, 2010) 。以往TLR 的研究主要在於免疫細胞上，可藉由 辨識入侵物的組成份而在先天性免疫系統中扮演著重要角色。目前已知 TLR 於人 407 體上共有十種，老鼠身上有十三種，可用來偵測各種外來物質，參與未引發專一 性抗體的「非特異性免疫反應」。但是在腸道細胞中 TLR 的功能則不同，其會影響 腸道上皮細胞之結合方式與狀態，進而改變蛋白 質及酵素的合成速率(Abreu, 2010) 。因此，我們結 合 TLR 與最初乳糖酶、乳糖不耐症的構想，希望 能辨析不同 TLR 與乳糖酶之關聯與其中之機制， 並探討微生物透過 TLR 對乳糖酶生產造成之影響， 進而找出提高腸道內乳糖酶生產量及降低乳糖不 耐症狀之方法。 貳 、文獻探討 Toll-like receptor (TLR)中文稱類鐸受體，是 I 型跨膜蛋白的一種，在先天性免 疫系統中起關鍵作用，能識別侵入體內的微生物進而激活免疫細胞。TLR 亦是一 類模式識別受體(Pattern Recognition Receptors) ，主要作用為識別與宿主不同的病原 體分子，進而引發免疫細胞的反應，如發炎反應、吞噬病原體、釋放干擾素、影 響蛋白質的合成等，並可能發生程序性細胞凋亡。 目前已在脊椎動物、無脊椎動物、植物及細菌中皆發現有 TLR 或相關受體的 存在。大多數的哺乳類動物有十至十五種的 TLR ，人類有十種，而每種動物所有 的 TLR 種類不盡相同，且不同的 TLR 會與不同的刺激物結合並被活化。 近期研究顯示，除了免疫作用外，人體腸內分泌細胞上之 TLR 亦能協助抵抗 病原體，且能誘導細胞增殖、促使細胞間緊密連接和阻止細胞凋亡，藉此修復上 皮細胞損傷，同時，TLR 亦能透過 TFF3 的誘發造成細胞遷移。而