发酵法生产白细胞介素培训资料.ppt

发酵法生产白细胞介素-2  白细胞介素-2 白介素－2是一个分子量为14500的糖蛋白，它刺激已被特异性抗原或致丝裂因数启动的T细胞增殖 【所属】免疫增强剂/其他抗肿瘤药及辅助治疗药 【别名】 白间素, 欣吉尔, T细胞生长因子 ,白细胞介素-2等 【适应症】主要用于肾癌、黑色素瘤和非何杰金淋巴瘤有效（Rossenberg）。LAK细胞代表1个有单核巨噬细胞，B和T淋巴细胞特征的异原的细胞体。这些LAK细胞似乎对癌细胞有特异作用。此外，LAK细胞（不象T细胞）介导杀伤不受MHC的约束。 应用 【药理作用】 本品可促进T淋巴细胞增殖与分化，诱导具有细胞毒样活力的杀伤细胞，诱导及增强杀伤性T细胞、单核细胞、巨噬细胞的活力等。 【临床应用】 适用于慢性活动性乙型肝炎病毒感染等；用于肾细胞癌、黑色素瘤的治疗，用于癌性胸腹水的控制及其他晚期肿瘤；用于先天或后天免疫缺陷症的治疗，如艾滋病，可提高病人细胞免疫功能和抗感染能力；各种自身免疫病的治疗，如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、干燥综合征等；对某些疾病性、杆菌性疾病、胞内寄生菌感染性疾病，如乙型肝炎、麻风病、肺结核、白色念珠菌感染等具有一定的治疗作用。 2 生产过程及工艺过程 (1)发酵 工程菌为大肠杆菌，温度敏感型。 种子用LB培养基； 发酵用M9CA培养基，30度10小时，后提高温度至42度，诱导3h。 传统工艺 鸡瘟病毒，PHA,培养液 [启动诱生] 37℃ 人白细胞粉 诱生白细 胞培养液 [灭活病毒，分离],HCl,NaOH pH = 2~2.5,pH = 7.2~7.4,离心 上清液 35%硫酸铵 4 ℃，24h，离心 上清液 85%硫酸铵 4 ℃，24h，离心 沉淀 10mmol/LPBS透析 pH = 6.5，24h 透析内液 [亲和层析] 上Sepharose柱 pH = 6.5 亲和载体I [洗涤] 0.4mol/LNaCl，PBS pH = 6.5 亲和载体Ⅱ [吸收] 1.0mol/LNaCl,PBS透析 pH = 6.5 IL-2组分 [凝胶层析] 上Utrogel柱 pH = 6.5 凝胶载体 0.2mol/Ltris-HCl含0.1%PEG 2%正丁醇，0.2mol/L甘氨酸 pH = 7.6 IL-2 酶法生产 1 工艺流程图 发酵 制备包涵体 洗涤与裂解 凝胶过滤与复性 检定与包装 (2) 分离纯化 包涵体制备 离心收集，菌体悬于EDTA溶液中，用超声波破碎细胞，后8000r/min离心，收集沉淀(包涵体和细胞碎片)。 凝胶过滤及复性： 上清过Sephacryl S-200柱，醋酸液洗脱，收集洗脱峰。 干燥： 用冷冻真空干燥 Thank you!