《生殖工程研究进展》.ppt

定义： 从受精到植入子宫内膜的整个过程中，一个或几个环节经过人为方法，产生新一代的生殖技术。现阶段主要包括人工授精和体外发生—胚胎移植。 一、人工授精 1、定义：是指搜集丈夫或自愿献精者的精液，由 医务工作者注入女性生殖管道达到受孕目的的一种技术。 2、发展史：1890年美国Dulemson R L首先应用，上个世纪三十年代剧增，据统计现阶段美国30，000/年人工授精的婴儿诞生。我国1983年湖南医科大学冷冻精液人工受精成功。 3、方式： （1）AIH: Artificial insemination husband. (2) AID: Artificial insemination donor. 4、适应症： ①AIH:丈夫或妻子生殖器及性功能异常不能正常性生活者 ；或丈夫精液精子少，收集后浓缩以提高授精能力。 ②AID：丈夫无精子，或患显性染色体病，或夫妻双方含同一常染色体隐性杂合病，男方Rh+,女方Rh –。 5.授精方式： ①由导管直接注入宫颈周围。 ②将导管插入宫颈管。 ③宫颈盖上塑料帽，将精液注入，留置24h。 6.IUI：宫腔内人工授精—宫颈原因不孕症,精子活力低,免疫性不孕症,原因不明性不孕症,丈夫精子不能到达子宫腔内者. 7.人工授精并发症： ①出血。 ②腹痛。 ③感染。 ④休克。 ⑤多胎。 ⑥卵巢过激综合症。⑦卵巢肿瘤。⑧先兆子痫。 二、冷冻精子库 1.发展史 1776年Spallanzani 在00C以下对精子生存的影响进行了研究，1866年Montezazza 提出建立精子库，1938年Jahnel在-790C 40天复温后发现精子可存活，当时用甘油作保护剂。1981年湖南医科大学卢广琇建立了精子库，并制定了一套适合我国国情AID方法和制度，现在全国共有20多个精子库，每年数千AID出生的婴儿。 据统计，美国已有100家冷冻精子库，在法国还建立了国家精子库研究中心。 我国湖南医科大学于1988年被卫生部授予国家精子库技术指导中心，现在建立了精子库数据库计算机管理系统，对精子库实行了计算机现代化管理，AID和AIH已成为治疗不育症的有效方法之一。 2、建立精子库的目的 1）提供“生殖保险”促进计划生育，冷冻条件下，精液可储存5年、10年或更长时间而保持受精能力。 2）为人类优生开辟新的途径。 3）给不育症家庭带来福音。 4）开展生殖生理学和低温生物学研究。 3、基本原理 在一定的低温条件下，以足够的时间作用于生物组织细胞，引起细胞的降温、凝固，非损伤性结冰，使生物细胞内分子运动减慢、停止，使细胞代谢降低处于休眠状态，从而达到储存细胞的目的。 4、影响人类精液冷冻储存的因素 1）温度休克： 指细胞不是由于直接的冷却作用，而是由于温度急剧变化造成的损害，人精子对冷冻休克有很强的抵抗能力，在冷冻过程中，可以10C/mm的降温速度通过温度休克阶段。 2）结冰时的热效应： 在通过+50C~-50C阶段时，由于精浆形成冰晶而释放热量，温度会突然升高，应快速通过此阶段。 3）临界温度范围（致死温度范围）： 从 -50C~-300C，尤其是-50C~-150C，精子常被杀死，精液由液相 固体相 ，伴冰晶形成及由此产生的急剧温度变化，造成精子死亡。添加冷冻保护剂后，以5~70C/mm的冷冻速度通过此阶段。 4）温度波动： 在温度低于临界范围时，由于冰晶的生长和相互作用，产生温度变化，称迁移性再结冰，从-300C~-1960C，用 20C/mm速度通过此阶段。 5、储存和应用方式 1）最早的冷冻方法是用干冰作制冷剂和储存剂近几年都用液氮蒸气作制冷剂和储存剂。 2）解冻速度快速复温1000C/mm，取出直接370C水中即可。 3）冷冻保护剂 为减轻冷冻和复温过程中的损伤，获得理想的冷冻生存率，必须在溶液中添加具有保护作用的物质，即冷冻保护剂，需具备2个基本条件①对冷冻的细胞无毒性，②具有高水溶性。其保护作用主要是减少冰晶的形成，同时稀释了细胞外液溶质的浓度。分两类： 6 、精液质量与冷冻前的放置时间 容积2-6ml，密度≥60×106ml,活动力﹥50%，且a级占绝大多数，精子正常状态70%以上，①取精1小时或动力﹥50%，②取精4小时精子活动力衰减﹤15%，③取精4小时直线运动程度无明显降低。 7、影响人工授精成功率的因素 1）冷冻储存的精子必须具备良好的冷冻生存率。 2）需连续4天人工授精，-1,0 ,＋1, ＋2 , 1ml/天。 3）选择人工授精最佳时间。 4）进行