不同日粮对羊瘤胃微生物数量的影响.docxVIP

不同日粮对羊瘤胃微生物数量的影响实验通过瘤胃微生物的计数来研究日粮中添加葡萄糖、尿素、无机盐等物质后对瘤胃微生物种类和数量的影响。葡萄糖可为瘤胃微生物提供能量，增加氨基酸的合成。实验中添加的尿素可以为瘤胃微生物提供氮源，尤其是经过处理后的尿素，可以使尿素氮缓慢的释放，减少了瘤胃内NH3-N瞬间释放量，有利于微生物对NH3-N的利用。无机盐类含有钠、钾、镁、铁、磷酸盐、硫酸盐等，基本上可满足细菌的生长需要。盐对于微生物生长的影响较为复杂。一般来说，盐类浓度太高时，对微生物生长有抑制作用，而有些盐类在较低浓度时却能刺激生长。也有些细菌在较高浓度的盐分中才能发育生长，微生物为了生存和生长，需要无机盐。通过实验结果表明，在饲喂添加了葡萄糖、尿素、无机盐等物质的日粮后，羊瘤胃微生物在种类和数量上均产生了变化。瘤胃中微生物的含量有增加。1 材料与方法1.1 实验动物将4只30～45 kg的成年母羊随机分组,并分别编号为1、2、3、4号。装置永久性瘤胃瘘管,瘘管直径为2.5 cm。在实验期间混圈饲养,单独饲喂。并自由饮水。1.2 实验设计采用对比法，实验期为15 d，预适用期为10 d。A组为1号羊、2号羊、3号羊，B组为4号羊。以A组为实验组，B组为对照组，两组分别饲喂2种不同的日粮饲料，A组喂给实验日粮(基础日粮+葡萄糖、尿素、无机盐等)，B组喂给基础日粮。1.3 日粮组成对照组日粮为基础日粮,日粮粗蛋白质(CP)和代谢能(ME)含量均参照GB/T6432制定。日粮成分见表1。实验日粮为添加实验试剂的日粮，该日粮要充分搅拌均匀。日粮添加成分见表2。1.4 样本采集1.4.1 采集用品200 ml试管、保鲜袋、水桶、报纸等。在饲喂前每只羊采集瘤胃液100 ml,饲喂后实验期中再采集100 ml。每次采集后立即测pH值，然后置于4 ℃冰箱内保存备用。1.4.2 采样方法将羊单独拴于一处，一人保定羊只，另一人采集，采集完的样品迅速包好装袋，防止污染。待全部采集完后放入冰箱保存备用。1.5 培养基的制备1.5.1 制备培养基所需实验用品土豆、西红柿、蒸馏水；托盘、刀子、纱布、烧杯、量筒、锅、培养皿、葡萄糖瓶子、线、高压灭菌器等。1.5.2 实验用化学制品葡萄糖、营养琼脂、水解乳蛋白、琼脂等。1.5.3 土豆培养基的制备土豆富含适于细菌生长的因子。①将1 500～1 800 g土豆洗净，去皮，切成小块，约玉米粒大小。②按500 g土豆兑1 000 ml水的比例，将土豆加水放入锅中煮30 min（或116 ℃煮20 min）至熟，然后双层纱布过滤出土豆汁。③取土豆汁150 ml装入干净的葡萄糖瓶中，加入葡萄糖3 g、琼脂6 g，再加水至300 ml，加热溶化，调节pH值至5.8。④在瓶口加入线绳盖在橡皮塞下，放入121 ℃高压灭菌器内灭菌20 min。然后取出备用。土豆培养基制备配方：土豆汁300 ml、葡萄糖（2%）6 g、营养琼脂（3.8%）11.4 g，pH值为6.2。1.5.4 西红柿培养基的制备西红柿汁适宜于乳酸菌的生长。要求原料西红柿新鲜，红皮，成熟度基本一致，清洗后在90~95 ℃热水中烫3 min，使外皮软裂，主要作用是杀灭西红柿表面的微生物和虫卵，破坏酶的活性，提高出汁率。然后榨汁。西红柿的出汁率可达80%~90%，经胶体磨均质5 min后由内碳酸钠调节酸度，使pH值达到6.2左右，因为西红柿汁本身的酸度较高，不利于乳酸菌的生长繁殖。①取1 500 g西红柿热水烫去皮，在托盘中切碎，双层纱布过滤榨汁。②取西红柿汁15 ml，加入水解乳蛋白3 g、营养琼脂11.4 g，再加水至300 ml，加热溶解，调节pH值至6.0~6.2。③在瓶口加入线绳盖在橡皮塞下，放入121 ℃高压灭菌器内灭菌20 min。然后取出备用。西红柿培养基制备配方：西红柿汁20 ml、水解乳蛋白10 g、营养琼脂15.2 g，pH值为6.2。1.5.5 培养基的制成将培养皿与土豆混合培养液和西红柿混合培养液一同放入高压灭菌器121 ℃，20 min灭菌。将在高压灭菌器中灭菌了的土豆混合培养液和西红柿混合培养液冷却至60 ℃时,在超净工作台上,开启后15 min在点燃着的酒精灯旁5 cm范围内倒入培养皿中，倒入量以盖住培养皿底为好。然后在酒精灯点燃的情况下冷却凝固，然后在培养皿底面标上标志及编号，并根据实验要求划分好区域备用。1.6 瘤胃液的稀释1.6.1 瘤胃液稀释所需用品青霉素小瓶40个，移液管2支，与移液管相匹配的两种枪头，灭菌后的生理盐水，大烧杯一个。按4.5 g氯化钠加500 ml蒸馏水的比例配制0.9%的生理盐水，然后将青霉素小瓶每6～8个用报纸包好，培养皿也同样是每5～6个包一包连同移液管枪头放入121 ℃高压灭菌器60 min灭菌。然后取出备用。1