蛋白质的结构与功能04745.ppt

蛋白质的结构与功能;一、什么是蛋白质?;二、蛋白质的生物学意义; ;1）作为生物催化剂（酶） 2）代谢调节作用 3）免疫保护作用 4）物质的转运和存储 5）运动与支持作用 6）参与细胞间信息传递 7) 有机体的组成部分 8) 凝血;三、蛋白质研究的意义;蛋 白 质 的 分 子 组 成The Molecular Component of Protein;一、组成蛋白质的元素;蛋白质的元素组成; 各种蛋白质的含氮量很接近，平均为16％。 ;二、氨基酸 —— 组成蛋白质的基本单位;（一）氨基酸的结构通式; ;非极性氨基酸 极性中性氨基酸 酸性氨基酸 碱性氨基酸;天冬氨酸 aspartic acid Asp D 2.97;甘氨酸 glycine Gly G 5.97;色氨酸 tryptophan Trp W 5.89;几种特殊氨基酸; ; 半胱氨酸 ; ;（三）氨基酸的重要理化性质;紫外吸收 ;3. 两性解离及等电点;pHpI;4. 氨基酸的化学性质;反应要点 A.该反应由-NH2与-COOH共同参与 B.茚三酮是强氧化剂 C.该反应非常灵敏，可在570nm测定吸光值 D. 测定范围：0.5~50μg/ml E.脯氨酸与茚三酮直接生成黄色物质（不释放NH3） 应用： A.氨基酸定量分析（先用层析法分离） B.氨基酸自动分析仪： 用阳离子交换树脂，将样品中的氨基酸分离，自动定性定量，记录结果。;（2） 与甲醛反应;(3) 与2,4-二硝基氟苯（DNFB）反应;★首先由Sanger应用，确定了胰岛素的一级结构 A.肽分子与DNFB反应，得DNP-肽 B.水解DNP-肽，得DNP-N端氨基酸及其他游离氨基酸 C.分离DNP-氨基酸 D.层析法定性DNP-氨基酸，得出N端氨基酸的种类、数目 ;(4)与异硫氰酸苯酯（PITC）的反应;Edman （苯异硫氰酸酯法）氨基酸顺序分析法实际上也是一种N-端分析法。此法的特点是能够不断重复循环，将肽链N-端氨基酸残基逐一进行标记和解离。 肽链（N端氨基酸）与PITC偶联，生成PTC-肽 环化断裂：最靠近PTC基的肽键断裂，生成PTC-氨基酸和少 一残基的肽链，同时PTC-氨基酸环化生成PTH-氨基酸 分离PTH-氨基酸 层析法鉴定 Edman降解法的改进方法--- DNS-Edman降解法 用DNS(二甲基萘磺酰氯)测定N端氨基酸 原理DNFB法相同 但水解后的DNS-氨基酸不需分离，可直接用电泳或层析法鉴定 由于DNS??强烈荧光，灵敏度比DNFB法高100倍，比Edman法高几到十几倍 可用于微量氨基酸的定量 ;三、肽;+;* 肽是由氨基酸通过肽键缩合而形成的化合物。;N 末端：多肽链中有自由氨基的一端 C 末端：多肽链中有自由羧基的一端;N末端;（二） 几种生物活性肽;GSH过氧化物酶; 体内许多激素属寡肽或多肽; ;蛋白质的分子结构The Molecular Structure of Protein;蛋白质的分子结构包括 一级结构(primary structure) 二级结构(secondary structure) 三级结构(tertiary structure) 四级结构(quaternary structure);定义 蛋白质的一级结构指多肽链中氨基酸的排列顺序。;一级结构是蛋白质空间构象和特异生物学功能的基础。;一级结构的测定;二、蛋白质的二级结构;（一）肽单元; (二）主链构象的分子模型;1. ?-螺旋;;2. ?-折叠;3. ?-转角;4.无规卷曲;（１）超二级结构 　　在蛋白质分子中，由若干相邻的二级结构单元组合在一起，彼此相互作用，形成有规则的、在空间上能辨认的二级结构组合体。几种类型的超二级结构：α α；ββ；βαβ；βββ． 　　★超二级结构在结构层次上高于二级结构，但没有聚集成具有功能的结构域．;　　　对于较大的蛋白质分子或亚基，多肽链往往由两个或两个以上相对独立的三维实体缔合而成三级结构。这种相对独立的三维实体就称结构域。　 结构域通常是几个超二级结构的组合，对于较小的蛋白质分子，结构域与三级结构等同，即这些蛋白为单结构域。 结构域一般由100~200个氨基酸残基组成，但大小范围可达40~400 个残基。氨基酸可以是连续的，也可以是不连续的． 结构域之间常形成裂隙，比较松散，往往是蛋白质优先被水解的部位。酶的活性中心往往位于两个结构域的界面上． 结构域之间由“铰链区”相连，使分子构象有一定的柔性，通过结构域