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Real-time PCR 两种标记技术 染料染色 SYBR Green 探针标记 TaqMan SYBR Green染料 染料法的优缺点 成本低 广谱性 适合初筛 无模板特异性 灵敏度低 条件优化 探针定量原理 阈值 CT值 荧光信号穿过阈值线时的循环次数 基线的调整 基线 阈值 CT值 CT值15，自动分析 CT值15，手动分析 GATC GATC CTAG CTAG GATC GATC CTAG CTAG CTAG GATC GATC CTAG 质粒DNA 目的基因 Bam HI限制性内切酶 基因克隆 2)基因检测 A’ 内源性病变基因 正常人 A 病 人 病原微生物基因 正常人 (-) 病 人 (+) 遗传病的诊断 基因缺失、插入或置换等 地中海贫血 珠蛋白链合成不平衡 A 正常人 病 人 正常 病人 ASO探针法 A C T G ASO探针 正常 病人 探针杂交 NC膜 探针 正常人 突变纯合子 突变杂合子 基因扩增-PCR PCR-RFLP法： 限制性内切酶 恶性肿瘤（癌基因或抑癌基因） ras 基因 突变 限制性内切酶 基因扩增-PCR 正常 突变 电泳 基因扩增-PCR HLA系统基因分型 PCR-RFLP法 PCR-SSO法 PCR-SSCP PCR-SSP 3)基因配型 PCR-SSP 1 2