生物显微技术知识进展.pptx

《组织学和细胞生物学进展》《细胞生物学专题》生物显微技术进展一、显微技术发展简史四、电子显微镜六、生物显微技术的应用二、普通显微镜和特殊光学显微镜三、光镜切片制作技术主 要 内 容五、电子显微镜样品制作技术透射电子显微镜扫描电子显微镜光学显微镜一、显微技术发展简史 一、显微技术发展简史 1.生物显微技术的概念生物显微技术是指在显微镜的观测范围内用生物材料作实验对象的专门技术。主要包括生物的组织、细胞化学，生物切片技术，显微观察，绘图测量及显微摄影技术，显微注射、切割、挑离等操作技术，还包括显微镜及相关设施的使用和保养。1665年，从英国物理学家罗伯特·虎克发现细胞开始，产生了显微技术。罗伯特·虎克：第一位显微技术学家。一、显微技术发展简史 2.生物显微技术的发展我国伟大科学家墨子早在二千多年前就研究了放大和缩小的作用，即研究了放大的基本原理。中国人戴眼睛已有一千多年的历史，是世界上最早的。因此可以说显微镜是中国人最早发明的 。公元1世纪初，在罗马哲学家的笔记中，大自然打磨的奇妙石头被称为“放大器”（magnifier）或“点火石”（burning glasses）。一、显微技术发展简史 荷兰人詹森于1590 年制造了第一台由二块透镜组成的复式显微镜。一、显微技术发展简史 1610年前后，意大利的伽利略和德国的开普勒在研究望远镜的同时，改变物镜和目镜之间的距离，得出合理的显微镜光路结构，当时的光学工匠遂纷纷从事显微镜的制造、推广和改进。一、显微技术发展简史 17世纪中叶，英国的罗伯特·胡克（用自己制造的显微镜观察软木切片，“细胞”）和荷兰的安东尼·冯·列文胡克（制造了只有一片凸透镜的显微镜，放大了300倍）都对显微镜的发展作出了卓越的贡献。一、显微技术发展简史 一、显微技术发展简史 1938年，德国工程师Max Knoll和Ernst Ruska制造出了世界上第一台透射电子显微镜(TEM)。Max Knoll(1897-1969) Ernst Ruska(1906-1988)一、显微技术发展简史 一、显微技术发展简史 1952年，英国工程师Charles Oatley制造出了第一台扫描电子显微镜(SEM)。一、显微技术发展简史 1982年，诺贝尔化学奖授予卓越的电镜应用者——英国的分子生物学家克卢格（A Klug）。1986年，瑞典皇家科学院将诺贝尔物理学奖授予电子显微镜的发明者——德国科学家恩斯特 · 卢斯卡（Ernst Ruska，1906-1988）；授予扫描隧道显微镜（STM）的设计者——德国物理学家宾尼希（Gerd Binnig，1947-）和瑞士物理学家罗雷尔（Heinrich Rohrer，1933-）。一、显微技术发展简史 时至今日，按照各种科学领域及研究对象的不同要求，利用不同的光学原理，已设计制造出多种多样的显微镜。一、显微技术发展简史 一、显微技术发展简史 3.生物显微技术发展的方向技术上将更快地向定量显微术方向发展；在仪器上不论是光学显微镜还是电子显微镜，都将从单一功能的仪器向多功能组合的大型仪器发展；在操作上将在更大程度上引入电子学技术，从而向更高的自动化操作发展；图象分析技术将迅速地在显微技术中广泛的应用；设法解决在超微结构水平上作活体的观察。一、显微技术发展简史 二、普通显微镜和特殊光学显微镜 1.普通显微镜1） 普通光学显微镜的结构普通光学显微镜由3部分构成，即：①照明系统，包括光源（普通钨丝灯或LED灯）和聚光器（孔径光阑和聚光镜）；②光学放大系统，由物镜和目镜组成，是显微镜的主体，为了消除球差和色差，目镜和物镜都由复杂的透镜组构成；③机械装置，用于固定材料和观察方便。二、普通显微镜和特殊光学显微镜 1 目镜2 镜筒3 镜臂4 粗调焦螺旋5 细调焦螺旋6 镜座7 物镜转换器8 物镜镜头9 载物台10 聚光器11 标本推进器12 光源二、普通显微镜和特殊光学显微镜 2） 普通光学显微镜的成像原理被观察物体AB位于物镜的前方，被物镜作第一级放大后成一倒立的实象A’B’。然后此实像再被目镜作第二级放大，成一虚象A’’B’’,人眼看到的就是虚像A’’B’’, 。二、普通显微镜和特殊光学显微镜 对任何显微镜来说，最重要的性能参数是分辨率，而不是放大倍数。分辨率是指区分开两个质点间的最小距离。这两个质点之间的距离取决于光源波长A，物镜镜口角α (标本在光轴的一点对物镜镜口的张角)和介质折射率N，它们之间的关系是： 镜口率＝N?sinα/2 式中：N=介质折射率；α=镜口角（标本对物镜镜口的张角）。镜口角总是要小于180?，所以sina/2的最大值必然小于1。 二、普通显微镜和特殊光学显微镜 3） 普通光学显微镜的基本概念分辨率：能够把两个点分辨开的最小距离。人们肉眼的分辨率一般只有0.2mm，光