第五章_微生物工程下游加工工程.ppt

一、重要性和特点 重要性 （1）获得商业产品的关键环节 （2）拥有市场竞争力的重要保障 一、重要性和特点 特点 （1）分离系统复杂，杂质多 （2）代谢产物浓度低，稳定性差 （3）代价高，回收率低 二、 基本原理 物理学过程 利用物性差异对包含多种成分的混合物进行分离、提纯。 （1）平衡分离过程（相的组成差别）：蒸气压、溶解度；蒸发（蒸馏、干燥）、结晶、吸附、萃取。 （2）拟平衡分离过程（分离场）：密度、电荷；离心分离、电泳。 （3）非平衡操作（速度差）：分子（粒子）大小、扩散（渗透）系数；超滤，膜透析。 二、基本原理 化学过程 利用化学作用达到分离、提纯的目的，适于高度选择性的精密分离。 （1）分子间作用力：范德华力、氢键、疏水性相互作用力；萃取、吸附层析、疏水层析。 （2）分子识别：酶和底物的专一性结合；亲和层析。 二、基本原理 生物过程 利用生物高分子的特异性相互作用达到分离、提纯的目的，具有高度选择性。 （1）锁钥关系：以蛋白质为代表的生物高分子，能分辨特定的物质，再与其可逆性结合；染料亲和层析。 （2）亲和色谱：利用某些生物物质之间特异的亲和力进行选择性分离的一种色谱分离技术；吸附、洗涤、洗脱、再平衡化。 （一）发酵液的预处理和过滤 1、发酵液的预处理 目的：改变发酵液的物理性质，加快沉降速度；使产物转入以后处理的液相中；除去部分杂质。 处理技术：絮凝、凝聚；稀释、加热。 （一）发酵液的预处理和过滤 1、发酵液的预处理 （1）高价无机离子(Ca2+、Mg2+、Fe3+)的去除方法 （一）发酵液的预处理和过滤 1、发酵液的预处理 （2）可溶性杂蛋白质的去除方法 a. 调节pH（等电点）与阴粒子物质（三氯醋酸盐、水杨酸盐、过氯酸盐等）、阳离子（Ag+、Cu2+、Zn2+、Fe3+、Pb2+）形成沉淀 b. 加入脱水剂（碱金属中性盐），使蛋白质沉淀 c. 加热 链霉素提炼（30℃）和柠檬酸发酵液（80℃）的预处理 d. 加入有机溶剂或表面活性剂使蛋白质变性凝固 e. 使用絮凝剂（无机、有机），例如 β-半乳糖苷酶的纯化 f. 吸附，例如四环类抗生素的提取，可用亚铁氰化锌钾吸附蛋白质 （一）发酵液的预处理和过滤 1、发酵液的预处理 （3）色素物质的去除 色素物质化学性质的多样性增加了脱色的难度。 常用方法：活性炭吸附法、离子交换剂、离子交换纤维。 （一）发酵液的预处理和过滤 2、发酵液的过滤 （1）发酵液的过滤特性——滤饼的比阻值rB （过滤速度） （一）发酵液的预处理和过滤 2、发酵液的过滤 （2）影响发酵液过滤速度的因素 （一）发酵液的预处理和过滤 2、发酵液的过滤 （3）提高过滤性能的方法 （二）微生物细胞的破碎和分离 1、微生物细胞壁的组成及其破碎阻力 （二）微生物细胞的破碎和分离 2、微生物细胞破碎的方法 （二）微生物细胞的破碎和分离 2、微生物细胞破碎的方法 （二）微生物细胞的破碎和分离 2、微生物细胞破碎的方法 （二）微生物细胞的破碎和分离 2、微生物细胞破碎的方法 （二）微生物细胞的破碎和分离 2、微生物细胞破碎的方法 （二）微生物细胞的破碎和分离 2、微生物细胞破碎的方法 （二）微生物细胞的破碎和分离 3、细胞破碎率的测定 （三）沉淀法 微生物工程下游加工工程 1. 盐析法（salting out） （2）影响盐析的主要因素 ①蛋白质浓度 ? 高浓度的蛋白溶液，可减少盐的用量；但共沉现象严重 ?用低浓度蛋白溶液进行盐析，需用较多的盐，共沉作用较轻 ②离子强度和种类 ?盐溶(salting in)： 许多蛋白在低盐浓度下发生盐溶现象（比在纯水中的溶解度大大增加）； ? 高盐浓度则盐析，离子强度越大，蛋白质的溶解度越低； ? 盐析剂种类很多，不同种类的盐对蛋白溶解度的影响是不同的；离子半径小且电荷高的离子对盐析作用的影响较强，离子半径较大而电荷低的离子影响较弱；不同种类的盐对溶解度的影响，主要是对Ks值的影响，Ks值越大，该盐的盐析效果越好。 ③温度 ? 温度是影响溶质溶解度的重要因素，升高温度可以增加许多无机盐和小分子有机化合物的溶解度； ? 但在高盐浓度中，蛋白质等生物大分子物质的溶解度随温度的升高反而减小 这主要是因为蛋白质分子在水化时要吸热，失水时则放热；温度升高有利于蛋白质失水沉淀。 ④pH ? 盐析pH的选择要以不降低产物的活性为原则； ? 由于蛋白质在等电点时最易沉淀，故可选择等电点的pH作为盐析pH （三）沉淀法 微生物工程下游加工工程 2. 有机溶剂沉淀法 （1）原理 ? 有机溶剂（丙酮、乙醇、甲醇）能降低水溶液的介电常数。 ? 当有机溶剂浓