兔病毒性出血症基因工程亚单位疫苗的研制及应用.ppt

免疫后3和7天，基因工程疫苗组比组织灭活疫苗组显著升高；其它时间点差异不显著 0、3天组织灭活疫苗组、基因工程疫苗组、对照组的血凝抑制效价（HI）均无显著差异；7到21天，基因工程疫苗组与对照组相比差异显著；7天到21天基因工程疫苗组与组织灭活疫苗组差异不显著。 * 疾病预防与控制研究室 疾病预防与控制研究室 兔瘟基因工程疫苗的研制及应用前景 * * 王　芳 国家兔产业技术体系 江苏省农业科学院兽医研究所 第七届（2017）中国兔业发展大会 内 容 研究背景 1 疫苗的特点 2 疫苗的应用前景 3 兔病毒性出血症（俗称兔瘟）是一种由兔出血症病毒引起的、以急性、高度传染性、大面积死亡为特征的兔传染病。病死亡率高达70% - 90%。对养兔业危害很大，必需进行免疫预防 国际兽医局（OIE）将该病列为B类传染 病，我国农业部53号令颁布为二类疫病 研究背景 兔病毒性出血症 病原：兔出血症病毒 一种正链RNA杯状病毒。由于至今尚未建立适合于病毒繁殖的敏感细胞株或理想生长条件，故病毒的体外培养尚不能进行（疫苗研制面临的困境） 在自然环境中，病毒有非常强的抵抗力和稳定性，在用乙醚、氯仿和胰蛋白酶处理后，病毒的感染性并不减弱。所以有利于兔瘟的传播 研究背景 国内 兔病毒性出血症灭活疫苗 兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病二联灭活疫苗 兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病、产气荚膜梭菌病（A型）三联灭活疫苗 国外 荷兰英特威公司的（MSD）粘液瘤-兔病毒性出血症疫苗（Nobivac Myxo-RHD?） 硕腾（Zoetis）公司（CYLAP? RCD VACCINE）的兔病毒性出血症疫苗 西班牙NOVARVILAP?公司的兔病毒性出血症疫苗，西班牙Hipra 公司的兔病毒性出血症疫苗（CUNIPRAVAC? RHD），BIOVTA公司的兔病毒性出血症疫苗等 国内、外主要采用组织灭活疫苗 预防措施 研究背景 非免疫兔的数量有限，疫苗抗原生产得不到保证，有时造成国内兔瘟疫苗供不应求的局面 不利于规模化生产及产品质量控制 生物安全性：存在潜在的散毒危险 因此，对疫苗生产企业要求有单独的强毒 攻毒动物房及组织灭活苗生产车间 组织灭活疫苗的缺点 研究背景 疫苗株（BAC-VP60株）的来源 从2006年开始，进行重组病毒构建工作 利用杆状病毒表达系统成功表达了RHDV VP60 在电子显微镜下观察，表达的重组衣壳蛋白可自我装配成类病毒样粒子(VLPs)，即为疫苗抗原 疫苗特点 生产疫苗的细胞及工艺 疫苗特点 用昆虫细胞培养生产疫苗抗原 可进行静置、转瓶半悬浮培养和反应器悬浮培养 　悬浮培养 （HA 1∶1024） 　可大规模生产，质量易于控制 * * 安全性试验 对不同品种家兔的超剂量接种安全试验 对怀孕母兔安全试验 最小使用日龄家兔安全试验 对肉兔生产性能的影响 质量研究 疫苗特点 * * 近期效力试验 质量研究 批次 数　量 （只） 注射剂量 （ml/只） 结　果 （死亡数/攻毒数） 1 5 1 0/5 2 5 1 0/5 3 5 1 0/5 4 5 1 0/5 5 5 1 0/5 对照组 5 ?0 5/5 疫苗特点 * * 免疫期试验 质量研究 疫苗特点 免疫产生期短 7日可以产生免疫保护。 攻毒时间 （免疫后天数） 批次 攻毒剂量 （ml/只） 免疫组 （死亡数/攻毒数） 对照组 （死亡数/攻毒数） 7 1 1 0/5 5/5 2 1 0/5 4 1 0/5 10 1 1 0/5 5/5 2 1 0/5 4 1 0/5 14 1 1 0/5 5/5 2 1 0/5 4 1 0/5 * * 免疫期试验 质量研究 疫苗特点 免疫持续期长：免疫后可以产生7个月的免疫保护。 免疫后（月） 批次 攻毒剂量 （ml/只） 免疫组 （死亡数/攻毒数） 对照组 （死亡数/攻毒数） 5 1 1 0/5 5/5 2 1 0/5 3 1 0/5 6 1 1 0/5 5/5 2 1 0/5 3 1 0/5 7 1 1 0/5 5/5 2 1 0/5 3 1 0/5 8 1 1 0/5 5/5 2 1 0/5 3 1 0/5 * * 对流行毒株保护试验：免疫后可抵抗近几年不同地区分离的RHDV 强毒的攻击，具有较好的保护作用。 攻毒毒株 组别 动物数量 结果（