一种新的提取脂肪间充质干细胞的方法及对提取细胞的分离培养及鉴定.pdfVIP

研究简报 生命科学仪器 2O12第10卷／8月刊 一 种新的提取脂肪间充质干细胞的方法 及对提取细胞的分离、培养及鉴定 张校通 ，海 泉 ，胡忠国 ，申重阳 ，赵令卉 ，王小燕 ，陈静娴 ，郑榆坤 (1．成都清科生物科技有限公司干细胞转化医学研究中心，成都610000；2．重庆卓驰生物科技有限公司，重庆40070o) 摘要 目的：探讨建立一种新的从膨胀液中提取脂肪间充质干细胞(ADSCs)的分离方法。方法：收集含有脂肪间充质 干细胞的膨胀液，然后从膨胀液中分离出脂肪间充质干细胞并进行体外培养 ，观察培养间充质干细胞生长状态，流式 细胞术检测间充质干细胞干性标记物，细胞生长曲线比较新方法与运用传统方法分离脂肪间充质干细胞的增殖活性， 多向诱导分化鉴定其向成骨，成软骨及成脂方向分化的能力。结果：成功建立了一种新的从膨胀液中提取脂肪间充质 干细胞的分离方法 ；分离 自膨胀液的间充质干细胞数量虽然低于与等体积脂肪组织来源的间充质干细胞 ，但细胞生长 曲线分析结果表明其增殖速度快 ，生长至第8天时，密度基本等同于脂肪组织来源间充质干细胞。间充质干细胞表面 分子标记物CD73，CD90，CD105，CD45，CD34，CD1lb，CD19，HLA—DR表达测定结果显示正常，阳性细胞率与脂 肪组织来源的干细胞相近。多向诱导分化结果显示从膨胀液中分离的脂肪间充质干细胞可以向成脂、成骨和成软骨三 向分化。结论：新方法分离的细胞确为脂肪间充质干细胞，符合国际干细胞协会规定的定义标准。 关键词 膨胀液；脂肪间充质干细胞 ；分离 近年来干细胞的应用越来越广泛、”【。人们对它 细胞生长得均匀日】。脂肪干细胞在特定刺激因素下 的研究也越来越深入。间充质干细胞 (Mesenchymal 可分化为脂肪细胞 ，且经过长时间的培养，仍可维 stemcells，简称MSCs)是干细胞家族的重要成员， 持此种分化能力H1。因此 ，脂肪间充质干细胞被广 来源于发育早期的中胚层和外胚层。MSCs最初在骨 泛的应用在医学、美容方面。 髓中发现，因其具有多向分化潜能、造血支持和促 膨胀液是在1000ml生理盐水中加入20ml利多 进干细胞植入、免疫调控和 自我复制等特点而Et益 卡因、1ml肾上腺素和32万单位庆大霉素。盐水中 受到人们的关注。如间充质干细胞在体内或体外特 加人利多卡因的作用是起到局部注射麻醉的作用。 定的诱导条件下，可分化为多种组织细胞，连续传 而加入肾上腺素的作用是使血管扩增和皮肤、黏膜 代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为 的血管缩小，其与利多卡因一起使用可以起到止血 理想的种子细胞用于衰老和病变引起的组织器官损 的作用。 伤修复。脂肪间充质干细胞(Adipose—derivedstem 目前，脂肪间充质干细胞的分离主要来源于抽 celia，ADSCs)是一种来源广泛、含量丰富、分离简 取的脂肪组织。相关的论文及已有的专利 申请 ，目 单的间充质干细胞，属于成体干细胞的一种 ，被认 前都是从脂肪组织中提取 ，例如 ：一种脂肪干细胞 为是脂肪组织中具有干细胞特性的细胞群，脂肪间 的分离培养方法 ；人脂肪成体干细胞的获取方法及 充质干细胞是具有多向分化的干细胞 【。研究证实 该干细胞库的构建方法；一种脂肪间充质干细胞的 来 自脂肪组织的干细胞在培养后也比其他来源的干 分离培养方法及其应用；从脂肪组织 中分离间充 第一作者简介：张校通 (1984一)，男，主要研究方向为细胞免疫治疗。 E-mail：zhangxtwl@163．corn 6 万方数据 生命科学仪器