紫外-可见分光光度法标准规范操作规程.doc

紫外-可见分光光度法标准操作规程 1 简述 3 紫外-可见分光光度计的检定 3.1 波长准确度 3.1.1 3.1.2 波长准确度检定方法 3.1.2.1 用低压汞灯检定 关闭仪器光源，将汞灯(用笔式汞灯最方便)直接对准进光狭缝，如为双光束仪器，用单光束能量测定方式，采用波长扫描方式，扫描速度“慢”(如15nm/min)、响应“快”、最小狭缝宽度(如0.1nm)、量程0～100%，在200～800nm范围内单方向重复扫描3次，由仪器识别记录各峰值(若仪器无“峰检测”功能，必要时可对指定波长进行“单峰”扫描)。 单光束仪器以751G型为例，可将选择开关放在×0.1位置，透光率读数放在100(或选择开关放在×1，透光率放在10)，关小狭缝，打开光闸门，缓缓转动波长盘，寻找汞灯546.07nm峰出现的位置，若与波长读数不符，应调节仪器左侧准直镜的波长调整螺丝，如波长向短波长方向移动，应顺时针方向旋转波长调整螺丝，如向长波长方向移动，则应反时针方向旋转波长调整螺丝，调整好后，再按汞灯的下列谱线测试，记录每条谱线与仪器波长读数的误差。 用于检定紫外-可见分光光度计的汞灯谱线波长：237.83，253.65，275.28，296.73，302.15，313.16，334.15，365.02，365.48，366.33，404.66(紫色)，435.83(蓝色)，546.07(绿色)，576.96(黄色)及579.07nm。 3.1.2.2 用仪器固有的氘灯检定 本法主要用于日常工作中波长准确度的核对。取单光束能量测定方式，测量条件同上述低压汞灯的方法，对486.02及656.10nm二单峰进行单方向重复扫描3次。 3.1.2.3 用氧化钬玻璃检定 将氧化钬玻璃放入样品光路，参比光路为空气，按测定吸收光谱图方法测定。校正自动记录仪器时，应考虑记录仪的时间常数，测定样品与校正时取同一扫描速度。 氧化钬玻璃在279.4，287.5，333.7，360.9，418.7，460.0，484.5，536.2及637.5nm波长处有尖锐的吸收峰，可供波长检定用。氧化钬玻璃因制造的原因，每片氧化钬的吸收峰波长有差异，另外，在放置过程中也会发生波长漂移，因此需定期由计量部门校验。 3.1.2.4 用高氯酸钬溶液检定 本法可供没有单光束测定功能的双光束紫外分光光度计波长准确度检定用。 高氯酸钬溶液的配制方法：取10%高氯酸为溶剂，加入氧化钬(HO2O3)配成4%溶液即得。 高氯酸钬溶液较强的吸收峰波长为241.13，278.10，287.18，333.44，345.47， 361.31，416.28，451.30，485.29，536.64，640.52nm。 如果是双光束扫描仪器，但不是数据贮存型的(指是直接将信号描记于记录纸上)，记录的波长可能因记录笔滞后而非真实波长，为了准确测定，建议采用定点检定而不用扫描方式。 3.2 吸收度准确度 精密称取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg，置1000ml量瓶中，用0.005mol/L硫酸液溶解并稀释至1000ml，用配对的lcm石英池，以0.005mol/L硫酸溶液为空白，在235，257，313，350nm分别测定吸收度，然后换算成测得值应符合表1中规定的允差范围。 表1 分光光度法允差范围 波长(nm) 吸收强度 吸收系数() 允差范围 235 最小 124.5 123.3-126.0 257 最大 144.0 142.8-146.2 313 最小 48.6 47.0-50.3 350 最大 106.6 105.5-108.5 分辨率、基线平直度、稳定度、绝缘电阻等项检定，按现行国家技术监督局“双光