[工学]紫外—可见分光光度法-reised.pptVIP

紫外-可见吸收光谱的产生 ● 物质对光的选择性吸收及吸收曲线 ● 吸收曲线的讨论： ● 吸收曲线的讨论： ●电子跃迁与分子吸收光谱 ? 能级跃迁 讨论： 讨论： 有机物吸收光谱与电子跃迁 ● σ→σ＊跃迁(单键电子的跃迁) ● n→σ＊跃迁(未成键电子(孤对电子)-成单键电子) ● n→π＊跃迁(非键的n轨道到π＊轨道的跃迁) ? 所需能量较小; ? 吸收波长一般大于200 nm; ? 含非键电子的不饱和烃衍生物(含N、O、S和卤素等杂原子)均呈现n→π* 跃迁。 ● π→π＊跃迁 ● 立体结构和互变结构的影响 ● 溶剂的影响 ● 溶剂的影响 ● 生色团与助色团 ? 红移与蓝移 ● 基本组成 ? 单色器 分光光度计的类型 光路图 定性、定量分析 ? 定量分析 ? 摩尔吸光系数 ? ?max：104 ~ 105 L· mol-1 · cm -1； ? ?：摩尔吸光系数(dm3?mol-1?cm-1），摩尔吸光系数在特定波长和溶剂的情况下是吸光质点的一个特征常数，在数值上等于吸光物质的浓度为1mol/L、液层厚度为1cm时溶液的吸光度。 ε 104???? 低灵敏度 ?ε 104~105????中等灵敏度 ?ε 105???? 高灵敏度 ? 对同一物质而言，ε随波长的变化而变化，非单色光导致对Lamber-Beer定律的偏离。 如果在偏离部分进行测量，将会引起较大的误差。 ? 为尽量避免由于非单色光引起的对吸收定律的偏离，一般选择峰值波长进行测量，在相同带宽的情况下，λmax对应的Δε1显著小于λ2对应的Δε2 。 Lambert-Beer定律 偏离Lambert-Beer定律的因素 与测定样品溶液有关的因素 与测定样品溶液有关的因素 吸光质点（亚甲基蓝 ）聚合引起的对吸光定律的偏离 与仪器有关的因素 分析条件的选择 分析条件的选择 分析条件的选择 分析条件的选择 ?? 从理论上讲，所有对紫外光、可见光有吸收的有机物、无机物都可以用紫外－可见分光光度法进行直接测定； ? ? 在实际工作中，通常使弱吸收物质发生化学反应生成一种新的具有强吸收性质的吸光物质，以提高光度测量的准确性和分析方法的灵敏度。此反应称为显色反应，所用的试剂称为显色剂。 干扰及消除方法 ? 络合物组成的测定 ? 摩尔比法测络合比（饱和法） ????M + nR = MRn ????cM , 固定；????cR , 从 0 开始增大 在特定波长测量 ? 等摩尔连续变化法（Job）测络合比????M + nR = MRn ????cM+ cR = 常数????cM /c 从 0 →1 ????在特定波长测定 ? 离解常数的测定 ? 显色反应 显色反应 ? 显色反应的要求 ? 反应的生成物必须在紫外、可见光区有较强的吸光能力，即摩尔吸光系数较大，反应有较高的选择性； ? 反应生成物应当组成恒定、稳定性好，显色条件易于控制等，这样才能保证测量结果有良好的重现性； ? 对照性好，显色剂与有色配合物的?max的差别要在60nm以上。 ? 酸度 ? 酸度影响显色剂的解离、被测离子的水解和被测组分的存在形式。有干扰组分存在时，也会引起干扰反应的改变; ? 控制方法：加入缓冲溶液 ? 显色反应条件的选择 酸度的影响 ? 试剂浓度 ? 显色剂通常是有机弱酸，溶液酸度的增加，会抑制显色剂的解离，干扰离子的存在要额外消耗显色剂，为抑制不稳定络合物的解离，需要加入过量的显色剂。合适的试剂浓度，要由实验来确定; ? 显色络合物在有机溶剂中的解离比在水相中小，因此，在有机相中进行分光光度测定常常是有利的; ? 显色时间 ? 显色反应速度不同，显色化合物的稳定性存在差异，因此必须控制显色时间。同时，溶液的酸度与显色剂的浓度将会影响到显色时间; ? 显色温度 ? 分光光度法通常是在室温下进行。但有些显色反应需要在较高温度下进行; ? 参比选择 参比溶液选择的基本原则是参比溶液的吸收能扣除非待测组分的吸收。即：?A（试液） = ?A（待测吸光物质）＋?A（干扰）＋?A（池） A（参比） = ?A（干扰）＋?A（池） 例如显色反应 M＋R = M-R (λmax) 在M-R的峰值吸收波长λmax进行测量，根据样品溶液显色试剂及溶剂对λmax光吸收的不同，选择不同的参比溶液。 显色试剂、样品溶液 及待测组分M的掩蔽剂 吸收 无吸收 有一定吸收 有一定吸收 4 显色试剂 吸收 无吸收 有一定吸收 无吸收? 3 不加显色试剂的 样品溶液 吸收 无吸收 无吸收 有一定吸收 2 溶剂 吸收 无吸收 无吸收 无吸收 1 参比溶液组成 M-R 溶剂 显色试剂 样品溶液? No. ? 溶剂参比 当试样溶液的组成简单，共存的其他组分很少且对测