[高等教育]第3章2 工业微生物的代谢调节和代谢工程.pptVIP

3.2初级代谢及代谢调节 初级代谢 微生物体维持和生长所必须的代谢通称为初级代谢。这些微生物的初级代谢主要包括糖类的分解代谢和合成代谢；氮源的分解代谢和氨基酸的合成代谢；脂肪的分解代谢和合成代谢；核苷酸的合成代谢等。 3.2.2初级代谢调节 诱导 诱导酶比较普遍地存在于微生物界 避开诱导控制 避开诱导控制 诱导物为限制性基质的恒化器中筛选 亲株生长在含有很低诱导物的恒化器中，有利于不需诱导物的组成型突变株的生长。 轮番在含有和不含诱导物的培养基内培养 葡萄糖培养基中有利未变新株生长，转移至乳糖为唯一碳源的培养基中有利于组成型突变株的生长。 每次转移至葡萄糖培养基上，会使亲朱产生的β-半乳糖苷酶的合成产即停止。 避开诱导控制 使用诱导性能很差的基质 突变体转移至一种能作为碳源、不能做为诱导物的基质上，可筛出组成型突变株。 使用阻碍诱导作用的抑制剂 在含有诱导物和诱导物抑制剂的培养基中，因酶的诱导受抑制，只有那些不需要诱导物的突变株才能生长。 避开诱导控制 提高筛选效率 β-半乳糖苷酶组成型突变株筛选时，在甘油为碳源的培养基上，菌落长成后，喷洒O-硝基- β-D-半乳糖苷，没有诱导物下，只有组成型突变株能产生β-半乳糖苷酶，将无色的O-硝基- β-D-半乳糖苷水解，释放黄色的O-硝基苯酚。 3.2.2初级代谢调节 反馈调节 直链式代谢途径中的反馈抑制作用 3.2.2初级代谢调节 分支途径中末端产物的抑制作用 同工酶 3.分支生物合成途径中末端代谢产物的阻遏作用 4 避开末端代谢产物的反馈调节 避开方法： 改变培养条件来限制末端代谢产物在细胞内部的积累； 从遗传上改造微生物，使之对末端产物反馈调节作用不敏感。 ⑴控制培养基的成分 使培养液中尽量少含阻遏物的成分，或限制末端产物在细胞内部积累可提高酶的产量。 ⑵加入生物合途径的抑制剂 苏氨酸-tRNA合成酶抑制剂使天冬氨酸激酶和高丝氨酸脱氢酶产量增加5倍。 ⑶限制补给营养缺陷突变株所需的生长因子 半饥饿状态导致合成酶的大量合成 ⑷采用仅能被生产菌株缓慢利用的末端代谢产物的衍生物 尿嘧啶营养缺陷型菌株生长在含有双氢乳清酸的培养基中，可使天冬氨酸转氨甲酰酶的产量增加1000倍。 ⑸分离抗反馈突变株的方法 抗反馈调节突变株：对反馈抑制不敏感或对反馈抑制有抗性的组成型突变株或兼而有之的菌株。 组成型突变株：在调节基因或操纵基因上发生了突变，对末端产物不敏感，导致反馈抑制或反馈阻遏被解除，从而可过量合成某种代谢产物。 3.2.2.4能荷调节 3.3次级代谢及次级代谢调节 定义：微生物在一定的生长时期(一般是稳定生长期)，以初级代谢产物为前体，合成一些对微生物的生命活动没有明确功能的物质的过程。 3.3.1次级代谢产物的特征 1. 次级代谢产物一般在菌体生长后期合成 2. 次级代谢产物合成时常伴随菌体形态或生理学上的变化 3. 次级代谢产物具种特异性 4. 次级代谢产物酶的专一性低 5. 次级代谢产物的合成受多基因控制 3.3.1次级代谢产物的特征 1. 次级代谢产物一般在菌体生长后期合成 次级代谢产物的生物合成有一个明显的特征，一般是在生产菌的生长结束之后才出现。因此，产生次级代谢产物的生产菌的生命活动可以分为两个时期，即营养生长期和次级代谢产物形成期。次级代谢产物的合成过程一般是在培养液中缺乏某种营养物质，菌体的生长受到限制时被启动。 3.3.1次级代谢产物的特征 2. 次级代谢产物合成时常伴随菌体形态或生理学上的变化 如一些产芽孢细菌此时会形成芽孢；真菌和放线菌会形成孢子；菌体的生长速率、分支状况和球菌的大小，都是获得次级代谢产物高产的重要因素。因此，有人把次级代谢产物的合成作用看作是细胞分化的伴随现象。 3.3.1次级代谢产物的特征 3. 次级代谢产物具种特异性 微生物的不同菌株能够产生多种在分子结构上完全不同的次级代谢产物。如灰色链霉菌不仅产生链霉素，而且还可以用来生产柱晶白霉素、吲哚霉素、灰霉素和灰绿霉素等。 不同种类的微生物亦能够产生同一种次级代谢产物。如能产生青霉素的微生物包括有点青霉、产黄青霉、土曲霉、构巢曲霉、发癣霉属的一些真菌以及某些链霉菌等。 3.3.1次级代谢产物的特征 4. 次级代谢产物酶的专一性低 相对来说催化初级代谢产物合成的酶专一性强，而催化次级代谢产物合成的某些酶专一性较低，因此在某种次级代谢产物合成的培养基中加入不同的前体物时，往往可以导致机体合成不同类型的次级代谢产物。正因为如此