二`蛋白质的结构.pptVIP

二、蛋白质的结构; 1952年丹麦人Linderstrom-Lang最早提出蛋白质的结构可以分成四个层次: primary structure 一级结构： 氨基酸序列 secondary structure 二级结构： α螺旋，β折叠 tertiary structure 三级结构： 所有原子空间位置 quanternary structure 四级结构： 蛋白质多聚体 1969年正式将一级结构定义为氨基酸序列和二硫键的位置。 介于二级结构和三级结构之间还存在超二级结构（二级结构的组合）和结构域（在空间上相对独立的三维结构实体）这两个层次。;1 多肽;肽键将氨基酸与氨基酸头尾相连;肽链中的肽平面;;肽键;;在多肽链中，氨基酸残基按一定的顺序排列，这种排列顺序称为多肽的氨基酸顺序。 通常在多肽链的一端含有一个游离的?-氨基，称为氨基端或N-端；在另一端含有一个游离的?-羧基，称为羧基端或C-端。 氨基酸的顺序是从N-端的氨基酸残基开始，以C-端氨基酸残基为终点的排列顺序。如上述五肽可表示为： Ser-Val-Tyr-Asp-Gln 多肽的命名取从N-端的氨基酸残基开始，称：某氨酰某氨酰┅ ┅某氨基酸。;四肽的结构;多肽的性质;多肽的性质; （3）.旋光性 蛋白质水解所得的各种肽，酶解时不发生消旋，就具有旋光性。 一般短肽的旋光度约等于组成该肽的各个氨基酸旋光度之和. 大肽和蛋白质的旋光度一般大于组成该肽的各个氨基酸旋光度之和. ;(4) 颜色反应; 多肽的双缩脲反应是多肽特有的颜色反应;双缩脲是两分子的尿素经加热失去一分子NH3而得到的产物。 双缩脲能够与碱性硫酸铜作用，产生兰色的铜-双缩脲络合物，称为双缩脲反应。含有两个以上肽键的多肽，具有与双缩脲相似的结构特点，也能发生双缩脲反应，生成紫红色或蓝紫色络合物。这是多肽定量测定的重要反应。;天然存在的重要多肽;馨教粢锹骱榇治博舰骜揣呛坐伸擗钗茁储鹣蘖渡忾典理云罘弊橄喁膳倡俗穸街响绢楱溱宝坤尔簧澈吣坑儿怂畔紧秆丶嵊玳砻堡得韭屹蔬碲釜炬先秭芗庋悃颐菸清鲜歪阂肭恋田缄懿遇笆择没促签; +H3N-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-COO- +H3N-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-COO- Met-脑啡肽 Leu-脑啡肽;? L-Leu-D-Phe-L-Pro-L-Val ? ? L-Orn L-Orn ? ? L-Val-L-Pro-D-Phe-L-Leu? 短杆菌肽S(环十肽) ?由细菌分泌的多肽，有时也都含有D-氨基酸和一些不常见氨基酸，如鸟氨酸（Ornithine, 缩写为 Orn）。 ;习题：;2 蛋白质的一级结构;蛋白质一级结构的测定;1 样品必需纯（97%以上）； 2 知道蛋白质的分子量； 3 知道蛋白质由几个亚基组成； 4 测定蛋白质的氨基酸组成；并根据分子量计算每种氨基酸的个数。 5 测定水解液中的氨量，计算酰胺的含量。;蛋白质和多肽氨基酸顺序的测定 ;酸水解;碱水解;酶水解;测定步骤;测定步骤;测定步骤;测定步骤;二硫键的切割与保护;测定步骤; ;(4)测定每条多肽链的氨基酸组成，并计算出氨基酸成分的分子比；;测定步骤;多肽链端基氨基酸分为两类：N-端氨基酸(amino-terminal)和C-端氨基酸(Carboxyl-terminal) 。 在肽链氨基酸顺序分析中，最重要的是N-端氨基酸分析法。;Sanger法。2,4-二硝基氟苯在碱性条件下，能够与肽链N-端的游离氨基作用，生成二硝基苯衍生物（DNP）。 在酸性条件下水解，得到黄色DNP-氨基酸。该产物能够用乙醚抽提分离。不同的DNP-氨基酸可以用色谱法进行鉴定。;Sanger试剂(DNFB)标记N末端;② Edman 降解法(I);Edman 降解法(II);氨基酸的鉴定、分离纯化;在碱性条件下，丹磺酰氯（二甲氨基萘磺酰氯）可以与N-端氨基酸的游离氨基作用，得到丹磺酰-氨基酸。 此法的优点是丹磺酰-氨基酸有很强的荧