sk实验1大肠杆菌的培养和分离.ppt

第一区域 第二区域 第三区域 第四区域 第五区域 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物 每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落 划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 2.涂布分离法 (1)梯度稀释操作: 涂布分离法操作 玻璃刮刀 大肠杆菌的培养和分离 （一）制备LB培养基（通用的细菌培养基） 1、配方：蛋白胨0.5克，酵母提取物0.25克， 氯化钠0.5克，水50ml （配固体培养基再加琼脂1克） 溶解 计算称量 调pH 分装 封口膜， 再牛皮纸封口 2、流程 一、 操作步骤 灭菌 倒平板 ①分装：注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，因此在将培养基转移到三角瓶或试管中时必须用__________。 ②封口：试管用塑料盖或________；三角瓶口用_______或_________封口,再用_________或报纸封口。需要时再用牛皮纸或报纸包扎 ③灭菌： 三角漏斗 棉花塞 封口膜 6层纱布 牛皮纸 高压蒸汽灭菌法 保温保压： 出锅： 当锅内压力升到_______kg/cm2时，控制 热源，维持压力至______min。 切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压 力降至____时，打开________，旋松螺栓，打开 盖子，取出灭菌物品。 0 1 15 排气阀 否则会因锅内压力较高，打开气阀后造成的压力差 可能使容器内的培养基喷溅造成棉塞沾染培养基而 发生污染，甚至使容器爆炸。 灭菌后，通常将实验用具放入60℃~80 ℃_____ 中烘干，以除去灭菌时的水分，避免引起_____。 烘箱 污染 倒平板：待培养基冷却至_____ ℃时，将每只培养皿倒入_________ml未凝固的固体培养基，置于_____位置上，轻轻晃动使其均匀铺满平皿底部，待凝，使之形成平面。 制斜面：将未凝固的固体培养 基的试管____放，冷却待凝使即 成为斜面。 ６０ 10～12 水平 斜 ④倒平板、制斜面 操作平台： 灭菌好的培养基和实验器具置于超净台上打开_________和___________，灭菌30min. 过滤风 紫外线 超净台 倒平板 （二）液体培养基接种培养 主要器具： 操作方法：先将接种环进行_____灭菌, ______后 的接种环挑取少量菌种，放入三角瓶的液体培养基 中，加塞。置于____℃摇床振荡培养１２小时。 无菌操作：略 摇床 思考：如何冷却接种环？ 可通过接触试管内壁或未 长菌的培养基达到冷却的 目的。 接种环、摇床等 ３７ 灼烧 冷却 （三）平板上的划线分离法 主要器具： 操作过程： 注意： 无菌操作方法：同前。 将培养皿______（盖在下），放于_____℃恒温培养 箱中培养__________小时。 在作第二次以及其后的划线操作时，要从 上一次划线的开始________划线。 接种环、 思考：若如上图所示进行划线分离，则接种环总 共进行几次灼烧灭菌？ 恒温培养箱。 每次划线前接种环都要灼烧灭菌，再冷却。 末端 １２～２４ 倒置 ３７ 细菌的划线分离 菌种的保存 1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。 2、长期保存：甘油冷冻管藏法 平板划线的操作方法 交叉划线法 连续划线法 思考题： A、操作过程中避免带入杂菌的方法有哪些？ 1、灭菌后的培养基、器具置于超净台上，并打 开超净台的紫外灯和过滤风，灭菌30分钟。 2、用镊子夹出洒精棉球擦拭桌面和实验者双手。 3、整个操作在酒精灯火焰旁进行 4、打开后或加塞前试管口、三角瓶口灼烧灭菌。 B、培养基灭菌后，需要冷却到60后才倒平板，你 用什么办法来估计培养基的温度呢？ 可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的 温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 思考题 C、为何要将平板倒置？ 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基 表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养 基面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠 落培养基，