免疫学实验课件-试验三 抗生素与细菌的药敏实验.pptVIP

微量液体稀释法 * 2、纸片扩散法（disc diffusion test) （Kirby-Bauer法） 原理： 将浸有抗菌药物的纸片贴在涂有测试菌的琼脂平板上。抗菌药物向琼脂四周扩散形成递减的梯度浓度。 药物敏感细菌在纸片周围一定距离内的生长受到抑制，形成抑菌圈。 抑菌圈的大小反映测试菌 对药物的敏感程度。 二者呈正相关。 * 抑菌圈边缘的药物浓度 与 MIC * 抑菌圈的大小与MIC： 二者呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。 * 纸片法药敏试验抑菌圈直径与结果解释的标准 抗菌药物与细菌 纸片含量 抑菌圈直径：mm 相应MIC μg/ml 耐药 中介度 敏感 耐药 敏感 丁胺卡那霉素 30μg ≤14 15-16 ≥ 17 ≥32 ≤16 氨苄青霉素 测肠杆菌 10μg ≤11 12-13 ≥ 14 ≥32 ≤8 测葡萄球菌 10μg ≤ 28 — ≥ 29 测嗜血杆菌 10μg ≤19 — ≥ 20 ≥ 4 ≤0.25 测肠球菌 10μg ≤16 — ≥16 ≤ 2 * 操作方法 ： 1. 制备M-H琼脂平板，厚度4mm。 2 .制备0.5麦氏比浊管浊度的菌液 （培养16～24h，4~5个菌落）。 3. 菌液均匀涂布于平板。（15分钟接种完毕） 4. 无菌贴标准抗生素纸片于M-H琼脂表面， 5. 经过35℃16～24h孵育。 6. 量取抑菌环直径， 根据CLSI标准， 报告细菌对该抗生素敏感、 耐药、中介。 * 操作方法 ： 1. 将在约56℃恒温的无菌M-H琼脂倾注直径为90mm 的平板，其厚度 4mm。 * 2.无菌挑取孵育16～24h的血平板上4~5个菌落。 * 3. 将菌置于无菌生理盐水中，校正其浊度于0.5麦氏比浊管浊度的菌液。 1.5×108CFU /ml * 4.用无菌棉签浸入细菌悬液中，将拭子在试管上壁轻轻挤压以挤去过多的菌液。棉签在三个方向均匀抹琼脂表面（每次转60℃）使菌液均匀分布，最后沿平板内缘涂抹一周。 * 5.盖上平板的盖子，放置培养箱内孵育，放置3~10分钟后贴上标准抗生素纸片。 * 6.用无菌镊子或纸片分配器将抗菌纸片粘贴于M-H琼脂的表面，一旦纸片贴上，不能移动；各抗菌纸片中心距离应大于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm。 * 7.经过35℃16～24h孵育。 8.取抑菌环直径， 根据CLSI标准，报告细菌对该抗生素敏感、耐药、中介。 * 纸片扩散法质量控制 培养基：M-H平板厚度，4 mm 细菌悬液：0.5麦氏标准的细菌浓度 药敏纸片的质量 各抗菌纸片中心距离应大于24mm， 纸片距平板内缘应大于15mm。 9cm的平板贴6个 培养时间 质控菌株 ↗ ↗ ↘ ↗ 抑菌圈直径？ ↘ ↘ ↗ * * * 细菌细胞膜外是一层坚韧的细胞壁，能抗御菌体内强大的渗透压，具有保护和维持细菌正常形态的功能。细菌细胞壁缺损后，由于菌体内的高渗透压，在等渗环境中水分不断渗入。致使细菌膨胀、变形，在自溶酶影响下，细菌破裂溶解而死亡。 细菌细胞壁主要结构成分是肽聚糖（粘肽），由N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰胞壁酸重复交替联结而成。 肽聚糖的生物合成可分为胞浆内、胞浆膜与胞浆膜外三个阶段。 胞浆内肽聚糖前体的形成可被磷霉素与环丝氨酸所阻碍。磷霉素抑制N-乙酰胞壁酸的形成；环丝氨酸抑制N-乙酰胞壁酸五肽的形成。 胞浆膜阶段的肽聚糖合成可被万古霉素和杆菌肽所破坏，分别抑制双糖五肽形成双糖十肽和双糖十肽转运至膜外受体的过程及脱磷酸反应。 胞浆膜外，青霉素与头孢菌素类抗生素抑制转肽酶的转肽作用，阻碍双糖十肽在胞浆外的交叉联接过程。 * * 2.加强药物外排作用：药物排出大于药物内流，降低药物在菌体内浓度。 3.磺胺耐药菌改变叶酸代谢途径，如直接利用外源性叶酸或二氢叶酸合成酶 抗生素与细菌的药敏实验 王宏伟 南京大学 医学院 第一节、抗生素的基础知识 化学治疗与抗生素 化疗: 对病原微生物、寄生虫及癌细胞所致疾病的药物治疗。 化疗药物 病原微生物（细菌