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第三节 转录调控 操纵子是原核生物转录调控的主要形式 一. 乳糖操纵子 （一）乳糖操纵子的结构与功能 （二）乳糖操纵子的负调控和正调控 （三）乳糖操纵子调控区的突变效应 背景介绍： 大肠杆菌通常利用葡萄糖作为碳源，通常情况下环境中乳糖极少，降解乳糖的酶不被合成，其实质是乳糖降解酶基因不表达。 Z编码β-半乳糖苷酶：将乳糖水解成葡萄糖和半乳糖 Y编码β-半乳糖苷透过酶：使外界的β-半乳糖苷（如乳糖）能透过大肠杆菌细胞壁和原生质膜进入细胞内。 A编码β-半乳糖苷乙酰基转移酶：乙酰辅酶A上的乙酰基转到β-半乳糖苷上，形成乙酰半乳糖。 ② 这个mRNA分子的启动子紧接着O区，而位于I与O之间的启动子区（P）。 ③当阻遏物与操纵基因结合时，lac mRNA的转录起始受到抑制。 ④诱导物通过与阻遏物结合，改变它的三维构象，使之不能与操纵基因结合，从而激发lac mRNA的合成。当有诱导物存在时，操纵基因区没有被阻遏物占据，所以启动子能够顺利起始mRNA的合成。 酶的诱导——lac体系受调控的证据 安慰诱导物： 如果某种物质能够促使细菌产生酶而本身又不被分解，这种物质被称为安慰诱导物，如IPTG（异丙基- β –D-硫代半乳糖苷）； TMG（巯甲基半乳糖苷）；ONPG（ O-硝基半乳糖苷）。 已经分离在有诱导物或没有诱导物的情况下都能产生lacmRNA的突变体，这种失去调节能力的突变体称为永久型突变体，为分两类：I型和O型。 I型：野生型为I+，突变型为I-O型：野生型为O+，突变型为Oc。 I+→I-或O+→Oc后，Z、Y、A结构基因均表现为永久表达，所以I基因被称为调节基因(regulatory gene)。研究发现，I基因是一个产生阻遏物的调节基因，其产物使体系关闭。I-突变体由于不能产生阻遏物，使细胞成为lac永久表达型。I-/I+局部二倍体由于带有一个正常阻遏物，使细胞中的lac仍然被抑制。 二 色氨酸操纵子 (一) 色氨酸操纵子的结构与功能 (二) 色氨酸操纵子的阻遏调节系统 （三）色氨酸操纵子的弱化机制 特点: (1) trpR和trpABCDE不连锁； (2) 操纵基因在启动子内； (3) 有衰减子(attenuator)/弱化子； (4) 启动子和结构基因不直接相连，二者被前导序列(Leader)所隔开 。 在E.coli，不同类型的启动子需要不同类型的σ因子 热休克基因（heat shock genes） σ32替换σ70 枯草杆菌（B.subtilis）中σ因子用于转录起始的调节 大部分σ因子转换的例子都发生在芽孢形成（sporulation）中。 当一种新的σ因子被激活，原来的σ因子被取代，通过σ因子转移的方式打开或关闭基因的表达。 枯草杆菌（B.subtilis）中σ因子的替换 芽孢形成过程中， σ因子的更迭次序为σ55、 σ28、 σ32、 σ37和 σ29。 含σ55的RNA聚合酶只能识别营养阶段有关的基因启动子。 含σ28的RNA聚合酶能够探测营养耗尽和起始芽孢形成反应的基因。 σ32和σ37负责识别早期芽孢形成基因的启动子。 含σ29的RNA聚合酶则负责中、晚期芽孢形成基因的转录。 修饰核心酶、替换σ亚基 T4噬菌体的时序调节依赖本身携带的蛋白对宿主的核心酶加以修饰,改变其和σ亚基的结合能力,乘机将本身编码的蛋白取代原来的σ亚基,从而改变RNA聚合酶的识别能力。 内部蛋白 ADP-核糖转移酶（ADPRT） 蛋白Mot 超修饰（hupermodified） 分子生物学常用参考书目 1． Molecular Biology (5th Edition by R Weaver) 2 ．现代分子生物学（朱玉贤等） 3. 分子生物学（杨荣武，南京大学出版社） 4. 药学分子生物学第三版， + + + + 转录 无葡萄糖，cAMP浓度高时 有葡萄糖，cAMP浓度低时 （2）CAP的正性调节 Z Y A O P DNA CAP CAP CAP CAP CAP CAP 协调调节 ※当阻遏蛋白封闭转录时，CAP不发挥作用； ※如无CAP存在，即使无阻遏蛋白与操纵序列结合，操纵子仍无转录活性。 单纯乳糖存在时，细菌利用乳糖作碳源； 若有葡萄糖或葡萄糖/乳糖共同存在时，细菌首先利用葡萄糖。 葡萄糖对 lac 操纵子的阻遏作用称分解代谢阻遏(catabolic repression)。 mRNA 低乳糖时 高乳糖时 葡萄糖低 cAMP浓度高 葡萄糖高cAMP浓度低 RNA-pol O O O O 乳糖操纵子的工作原理总结：1.负调控方式 P Z Y A 启动子 分解代谢乳糖的三种酶基因 O 操纵基因 调控区 结构基因 阻遏蛋白 乳 糖 变