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第2次课 细菌分离培养与生化鉴定 Lab of medical microbiology and Parasitology_02 Isolation and culture of the bacteria 1. 自学/讲解: 细菌生长条件 2. 示教: 细菌接种 3. 示教观察：细菌在液体、固体斜面、半固体、平板的生长状态 4. 示教观察：细菌生化反应（培养基、原理、结果、讨论） 5. 操作：空气中的细菌（每组，普通琼脂平板） 6. 操作: 手指皮肤的细菌 (每组，普通琼脂平板) 7. 操作: 健康人咽喉部细菌的分离（每人，咽拭子、血平板） 8. 思考题：咽喉部细菌分离鉴定程序（每人） 实验报告要求 1. 示教观察：细菌在液体、固体斜面、半固体、平板的生长状态 2. 示教观察：细菌生化反应（培养基、原理、结果、讨论） 3. 思考题：咽喉部细菌分离鉴定程序 细菌在培养基中的生长现象 固体培养基 液体培养基 半固体培养基 菌落：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。 菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性。 菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。 沉淀—成链生长 浑浊—均匀分散生长 菌膜—表面生长（厌氧菌） 有鞭毛细菌： 在培养基中沿穿刺线并向外扩散生长，穿刺线边缘模糊 无鞭毛细菌： 只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰 结果展示 细菌生长条件  细菌培养 培养基（culture medium）是细菌生长繁殖所需要的各种营养物质的人工制品。适宜的培养基能使细菌在体外迅速生长繁殖，便于对细菌进行分离和鉴别。可分为基础培养基、营养培养基、选择培养基、鉴别培养基、厌氧菌用培养基和特殊培养基。 基础培养基 　只含有细菌生长所需的最基本营养成分，应用最广泛，为制备多种培养基的基础，常见的有肉汤培养基、琼脂培养基。　　 营养培养基 　在基础培养基中加入葡萄糖、血液、血清、腹水或酵母浸膏等有机物，可供营养要求较高的细菌生长需要或增菌用。如结核分枝杆菌培养基中添加鸡蛋、马铃薯、甘油等。　　 选择培养基　利用不同种类细菌对化学物质的敏感性不同而制成，使分离菌大量繁殖而抑制其它细菌生长的培养基。培养基中含有的抑制剂能抑制非目的菌生长或使其生长不佳，有利于目的菌的检出和识别。选择培养基多为固体平板，用于从标本中分离某些特定的细菌。　　 鉴别培养基 培养基中加有某些特定成分，如糖、醇类和指示剂等，用于检查细菌的各种生化反应，以资鉴别和鉴定细菌。　　 厌氧菌用培养基 　专性厌氧菌须在无氧条件下才能生长，故需在培养基中加入半胱氨酸、硫乙醇酸钠等还原剂，降低培养基中氧化还原电势，并应与外界空气隔绝，使培养基本身为无氧的环境。　　 特殊培养基　为某些需要在特殊条件下才能生长的细菌培养之用。如高渗盐增菌培养基、高渗糖增菌培养基、改良 Kagan氏培养基等。 --------------------------------------------------------------- ①液体培养基(liquid medium)：液体培养基不含任何凝固剂，菌体与培养基充分接触，操作方便，常用于大规模的工业生产以及在实验室进行微生物生理代谢等基本理论的研究工作。可据培养后的浊度判断微生物的生长程度. ②固体培养基(solid medium)：天然固体营养基质制成的培养基，或液体培养基中加入一定量凝固剂（琼脂1.5～2％)而呈固体状态的培养基。为微生物的生长提供营养表面。常用于微生物的分离、纯化、计数等方面的研究。可依使用目的不同而制成斜面、平板等形式. ③半固体培养基(semi-solid medium)：在液体培养基中加入0.2-0.7％的琼脂构成的培养基。常用来观察细菌运动的特征，以进行菌种鉴定和噬菌体效价滴定等方面的实验工作。 细菌培养必须随时为防止污染和病原菌的扩散而进行操作，即无菌操作。细菌检验室的注意事项如下：1．细菌的培养应在接种罩或无菌室内进行。有条件的实验室可在超净工作台内进行。2．用接种环分离和移种细菌时，用前用后均需灭菌处理。一般采用火焰灭菌法。3．从培养瓶或试管培养物中取标本或移种时，在打开瓶口、管口或关闭前，均要在火焰上通过2～3次。切不可将含菌材料污染台面和其他物体。4．如不慎将试管等打破造成菌液污染时，不要惊慌，应立即报告负责人，然后用3％来苏或5％石炭酸处理污染台面或地面，至少浸泡30分种。5．工作完毕后，用紫外光灯照射30分钟，或用3％来苏擦拭台面，并清洗双手。 接种环和接种针使用接种环和接种针由三部分组成，即环（针）部分、金属柄部分和绝热柄部分。接种环和接种针通常选用电热（镍）丝，环的直径随使用目的而不同，一般多为2～4mm，环