《植物组织培养与快繁技术》PPT课件第1 - 质量工程.ppt

* * * * 3、组织培养实验室常用的器皿用具 培养用器皿：培养瓶、三角瓶、试管、L型管和T型管 、培养皿等 操作器皿：试剂瓶、容量瓶、量筒、移液管、烧杯，量杯等 操作工具：镊子、剪刀、解剖刀、接种工具 * * * 二、植物组织培养的基本技术 洗涤技术：玻璃器皿洗涤、塑料器皿洗涤 灭菌技术（培养基、培养用具灭菌）：湿热灭菌、干热灭菌、过滤灭菌、化学灭菌、辐射灭菌等。 无菌操作技术：无菌室的消毒、材料的消毒、接种等 * 三、 植物组织培养的步骤： * 组织培养流程图 * 第三章 植物离体快速无性繁殖 和无病毒植株的培养 * 一、植物离体快速无性繁殖 （一）快速繁殖的概念 植物的快速繁殖又称微繁，指将来自优良植株的茎尖，腋芽，叶片，鳞片等器官、组织和细胞进行离体培养，在短期内获得大量的遗传性一致的个体的方法。 * 2. 快速繁殖的优越性： （1）快速繁殖、短期满足大量需求 组织培养的最大优点在于短期内能用较少的材料繁殖大量优质种苗，具有用材少、周期短、速度快等特点。由于可人为控制培养条件，根据不同植物不同离体部位的不同要求而提供不同的培养条件，因此生长快，往往10—40天即为一生长周期。所以，虽然植物组织培养需一定的设备及能源消耗，但由于植物材料能按几何级数大量繁殖生产，故还是成本低廉，利于工厂化生产，能及时提供规格整齐一致的优质、无病菌的植物种苗。 * （2）单株培养，无性系遗传性状一致 利用高产单株进行植物的组织培养，可避免由于遗传原因导致的种苗性状不稳定，质量难控制等问题。 （3）获得无病毒植株 一些植物中由于受病毒的侵染，如花卉，药用植物等，用常规无性繁殖、易导致病毒累积，使品种退化，影响药材质量，用组织培养技术可获得无病毒植株。 * （4） 集约化生产，利于自动化控制 植物组织培养是在一定的环境条件下，人为提供一定的温度、光照、湿度、营养、激素等条件，进行高度集约的生产，使生产微型化、精密化，节约空间，节省人力物力，管理方便，大大提高了经济效率，利于进行自动化控制生产。 （5）利于生物转化，寻找新的有效药物成分 植物细胞内存在的羟基化酶、氧化酶、还原酶、甲基化酶、脂化酶、糖苷酶等多种酶，植物培养物作为一种生物反应器转化为外源化合物，能够产生原植物所没有的，甚至是自今自然界尚未发现的化合物。 * （6）提取次生代谢物质 获取生长快速，形状单一的细胞水平的理想材料。 （7）科学生产，条件可控误差小 植物组织培养是高密度科学培养生产，用培养基代替了土壤，各种营养成分，环境条件等完全可控。实验处理易于安排调配，处理问题误差小；而且进行无菌生产，摆脱了微生物的浸染及各种化学物质残留。 * （8）周年生产，不受季节限制 植物的组织培养是在人为提供的培养基质及小气候环境条件下进行生产的，摆脱了大自然中四季、昼夜变化及灾害性气候的影响。温度、光照等完全可控，条件均一，对植物生长有利。便于稳定地进行周年生产，不受时间、季节限制。 （9）种质资源的保存 很多无性繁殖的植物因没有种子供长期保存，其种质资源传统上只能在田间种植保存，耗费人力物力，且资源易受人为因素和环境因素而丢失。而用植物组织培养方法，可大大节省人力，大大延长保存期。 * 3. 应用、目的 ① 茎尖脱毒及无病毒苗木的试管快繁； ② 稀缺或急需的良种繁殖； ③ 珍稀，濒危植物的繁殖； ④ 自然界中无法进行有性繁殖或后代性状难以保证的植物的繁殖； ⑤ 种质的试管保存与交换。 * 4. 快速繁殖的的基本步骤 植物快速繁殖一般包括四个阶段，即无菌培养系的建立、组培苗的增殖、壮苗和生根、组培苗移栽。 * ① 无菌培养系的建立 无菌培养系的建立是快速繁殖的起始阶段，也是实现快速繁殖难度较大的阶段。在这个阶段，选取恰当的母株和外植体，获得无菌的繁殖体，诱导组培苗再生以及防止微生物污染和外植体褐变是成功获得组培苗的关键。 外植体的种类和选择: 性状稳定、生长健壮、无病虫害。还要考虑母株的生理状态、发育年龄、取材的季节和离体材料大小等。一般的根、茎、叶、花的培养材料，切割长度大致在0.5cm左右。茎尖、胚、胚乳等的培养，则按组织单位分割。 * 外植体的消毒和接种: 洗涤，冲洗2～4小时，再进行药剂消毒。 材料消毒：将冲洗好的材料用70％乙醇浸20～30秒钟，再置于消毒药剂中浸泡 (消毒的时间根据材料老嫩程度而定)。为了提高消毒效果，可同时使用二种消毒药剂交替浸泡或在混合液中浸泡。 将消毒液浸泡后的材料用无菌水清洗3～5次，每次3～5min，用无菌的吸水纸吸干水分，经过适当分割后接种于预先准备好的培养基中。 * 植物组织培养中常用的消毒剂及使用效果 消毒剂名称 使用浓度（％） 消毒时间 清除难易