高纯度质粒小提中量试剂盒.pdf

◆ 高纯度质粒小提中量试剂盒 ◆ 目录号 1218 ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 高纯度质粒小提中量试剂盒 目录号：1218  适用范围： 适用于5-15ml 中等规模质粒制备（mind preparations ）  试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成 保存 50 次 （121801） RNase A （10mg/ml） －20℃ 250µl 溶液P1 4℃ 25 ml 溶液P2 室温 25 ml 溶液P3 室温 35 ml 16ml 去蛋白液PE 室温 第一次使用前按说明加指定量乙醇 15 ml 漂洗液WB 室温 第一次使用前按说明加指定量乙醇 洗脱缓冲液 EB 室温 10ml 吸附柱AC 室温 50 个 收集管（2ml ） 室温 50 个 本试剂盒在室温储存12 个月不影响使用效果。 - 1 - 储存事项： 1. 第一次使用时，将试剂盒所带的全部RNase A 加入溶液P1 后（终浓度 100ug/ml） 置于2-8℃保存。如果溶液P1 中RNase A 失活，提取的质粒可能会有微量RNA 残留，在溶液P1 中补加RNase A 即可。 2. 环境温度低时溶液P2 中SDS 可能会析出浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分 钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。 3. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化，各溶液使用后应及时 盖紧盖子。 4.  产品介绍： 本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低 pH 值状态下选择性地结合溶液中的质粒 DNA ，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其 它细菌成分去除，最后低盐、高pH 值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA 从硅基质膜上洗 脱。  产品特点： 1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附 量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。 2. 独有的去蛋白液配方，可以高效去除残留的核酸酶，即使是核酸酶含量丰富的菌 株如JM 系列、HB101 也可以轻松去除。有效防止了质粒被核酸酶降解。 3. 快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。获得的 质粒产量高、纯度好， 可以直接用于酶切、转化、PCR 、体外转录、测序等各种 分子生物学实验。 - 2 -  注意事项： 1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机， 如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 2. 溶液P3和去蛋白液PE中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、 眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。 3. 提取质粒的量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。一般高拷贝质粒，建议 取5-15 ml 过夜培养14-16个小时的菌液，可提取出多达50µg-60µg的纯净质粒。 如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒，应适当加大菌体使用量，使用 10-20 ml过夜培养物，同时按比例增加P1 、P2 、P3 的用量，其它步骤相同。 4. 得