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培养基的制作及环境中微生物的分离和纯化 微生物实验 实验日期：2017.10.25 实验班级：生物技术 指导教师：张建丽 姓名：高熹 学号：1120152430 培养基的制作及环境中微生物的分离和纯化 一 实验目的 1.熟悉常用微生物培养基的配置、灭菌方法和原理。 2.掌握微生物的分离、纯化。 3.用稀释法分离微生物。 4.认识微生物存在的普遍性，对无菌操作的必要性、何时应该进行有大致理 解。 5.培养基的制作。 二 实验原理 1.微生物的分离和纯化 土壤是微生物多样性的重要场所，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌 株。 从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物 的分离与纯化。常用的是平板分离法。为了获得某种微生物的纯培养，一般是供 给它适宜的培养条件， 或提供抑制其他菌生长而有利于此菌生长的环境。再用稀 释涂布平板法或稀释后平板划线分离，纯化该微生物，直至得到纯菌株。 2.平板菌落计数法 平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释成单个细胞，接种培养，一个单菌 落代表原样品中的一个单细胞。 统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可 换算出样品含菌数。 三 实验仪器、材料和用具 1.实验材料： 菌源：土样 1g 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基 8 个 2.实验仪器: 不同的移液管；培养箱；平皿；涂棒；记号笔；酒精灯； 3.实验试剂: 牛肉膏；蛋白胨；NaCl；蒸馏水； 四 实验步骤 （一） 配置培养基 （上次课完成，灭菌，实验开始前倒平板） 配方，以 1000ml 培养基记： 牛肉膏:3.0g 蛋白胨:10.0g NaCl:5.0g 琼脂:15-25g 水:1000ml pH:7.4-7.6 （二） 周围环境中微生物的检测 在牛肉膏蛋白胨培养基上作如下实验： 1.取一个平板在空气中放置 10min。 2.另取一个平板在酒精灯火焰旁放置 10min。 （三） 从土壤中分离微生物 1．采土样:选择较肥沃土壤（生物系旧馆周围土地） ,去表层土,挖 5-20cm 微生物实验 深度的土壤。取土壤数 10g,装入烧杯,带回实验室。 2．制备土壤悬液：称取土样 1.0g，放入盛 99ml 无菌水的三角瓶中，用手振 荡 5min 使土壤均匀分散成为土壤悬液（10-2） 。 3．稀释：用移液管从中吸取 0.1ml 土壤悬液，注入事先分装有 0.9ml 生理 盐水的 Ep 管中，吹吸 3 次，摇匀（10-3） 。类推制得 10-4、10-5 的土壤悬 液。 4．涂布：用无菌吸头，分别吸取 10-3、10-4、10-5 浓度土壤稀释液 100ul，较 均匀地放入已写好稀释度的牛肉蛋白胨培养基平板上，用无菌玻璃涂棒 涂匀。每个浓度做 3 个平板。 5． 培养：将牛肉蛋白胨培养基平板倒置于 37温箱中培养 24 小时，统计 所长出的菌落数。 菌落计数：取出平板，算出统一稀释度三个平板上的菌落平均分布，换 算出土样中的菌含量。选择平均菌落数在 30~300 间的平板。 （四） 准备下一次实验的培养基 五 实验结果和分析 1.图一的左侧是 10-3 的照片，可以观察到，实验失败，菌落已经长成了菌苔。 2.图一右侧是 10-4 的照片，实验失败，菌落已长成菌苔。 3.图二左侧是 10-5 的照片，可以观察到无菌落存在，说明浓度太低，无法长 出菌落。 4.图二右侧上方是在空气中放置的照片，可以观察到长出两个菌落，下面是 在酒精灯附近放置的照片，无菌落长出。 六 实验小结 1.通过对环境中维生物的观察，意识到身边的微生物是很多的，了解了无菌 操作的有效性和重要性；同时也认识到周围的微生物也不是想象中那么多， 微生物实验 比如空气中不是多满满地悬浮着菌，它的密度其实不是很大的，另外酒精灯 旁边是无菌环境。 2.在土壤微生物的检测中，涂板很重要，我们的板中是无法计数的，这给实 验结果带来很大影响，推测原因是涂板没有涂开，下次应该涂久一点，看着 有液体的地方涂，另外，由图一图二能看出有少量可分辨的菌落，其外观较 大，说明可能与培养时间较长有关。 3.参考实验成功的小组的照片： 可以看出已经分出单菌落，可以观察出分离出了 46 个单菌落。 七 思考题 1.一般来说，肥沃土壤中细菌，放线菌和霉菌哪种最多？哪种最少？数量级 为多少？ 答：土壤中细菌可占土壤微生物总量的 70％～90％，其生物量可占土壤重量 的 1/10000 左右。但它们数量大，个体小，与土壤接触的表面积特别大，是 土壤中最大的生命活动面，也是土壤中最活跃的生物因素．推动着土壤中的 各种物质循环。细菌占土壤有机质的 1％左右。土壤中的细菌大多为异养型 细菌，少数为自养型细菌。土壤细菌有许多不同的生理类群，如固氮细菌、 氨化细菌、纤维分解细菌、硝化细菌、反硝化细菌、硫酸盐