两面针的红外鉴别及抗肝癌细胞的红外和拉曼光谱研究-药剂学专业论文 word格式.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 中文摘要 目 的： 本课题首先以广西道地中药材两面针作为研究对象，比较不 同产地两面针药材红外光谱图的差异及建立产地鉴别模型；比较分析生 长周期中的两面针药材红外光谱的差异并研究其动态累积过程中化学成 分的变化；在红外化学指纹图谱和生物活性之间建立谱效关系，以实现 化学成分与生物活性之间的统一。同时，将单细胞光镊拉曼光谱技术用 于两面针抗肝癌活性研究具有重要的临床应用意义。 方 法 ： 1. 基于傅里叶变换红外光谱(FTIR)技术，分别采用多种方法 对两面针的红外光谱数据进行校正后，利用SIMCA聚类分析法及Fisher 比值法建立产地分类模型。2. 测定不同采收期的两面针甲醇提取物的红 外谱图，选取1800 ~500cm-1红外指纹图谱进行比较分析，结合高效液相 法测定的不同采收期的两面针甲醇提取物中氯化两面针碱的含量为对 照，研究两面针药材在生长周期中的化学成分的变化。3. 基于不同产地 的两面针氯仿提取物的红外指纹图谱特征峰强度及其抗肿瘤活性的效 果，采用后退法构建以两面针抑制人肝癌细胞株BEL-7404和HepG-2两种 肿瘤细胞株的谱效模型。4. 采用两面针氯仿提取物中的活性成分对肝癌 细胞处理12h,24h,36h,48h，并利用显微拉曼光谱系统测定两面针药物处理 后不同时间段的细胞的光谱变化，并结合化学计量学方法对光谱数据进 行处理和分析，以期揭示光谱学变化所反映的生物学内涵，促进中药两 面针中的有效成分诱导肝癌细胞凋亡的生理过程的深入理解。 结 果： 1.不同产地的两面针红外光谱分别通过多元散射校正和标准 正态变换，均是两面针产地模型鉴别研究的理想校正方法。通过建立 SIMCA 模式识别，所建立的模型基本能够正确识别 4 个不同产地的两面 针样品，其鉴定结果的识别率和拒绝率均达到 90%以上。通过 Fisher 比 值法将建模过程通过自编程序，还可将模式识别模型实现实时在线检测 与快速鉴别样品。2. 红外光谱提供了两面针药材甲醇提取物中主要官能 PAGE PAGE 5 团的吸收情况，可以较好的反应两面针中物质的类别情况，并且对照高 效液相测定结果，二者反映两面针在动态累积过程中化学成分的变化结 果基本一致。3. 采用后退法建立多元线性回归方程，红外光谱中 14 个指 纹峰，有 9 个对 BEL-7404 细胞株的谱效方程有显著贡献（P＜0.05）， BEL-7404 的谱效关系式为： Y=-17.724+35.605X2-30.389X3+69.026X4+16.856X5-85.202X6+39.620X9+11.949X10-26. 533 X11-40.707 X14(P0.05 R=0.932) 有 8 个对 HepG-2 细胞株的谱效方程有显著贡献(P＜0.05），HepG-2 细胞 株的谱效关系式为： Y=43.102+23.200X2-30.999X3+31.077X4-27.450X5+29.374X7-35.692X12+113.295X13-98 .063X14(P0.05 R=0.915) 经过 7 批药材验证，谱效关系式的计算值和实际值的偏差率不超过 10%， 表明谱效关系式可用于预测两面针药材的抗肝癌药效作用。 4. 拉曼测定细胞光谱的结果显示，肝癌细胞BEL-7404在两面针氯仿提取 物作用后，细胞发生凋亡，细胞中的核酸，蛋白质等重要生物分子在结 构和含量上都发生了不同程度的改变，反映了肝癌细胞中核酸和蛋白质 含量的谱峰随药物处理时间的延长而显著降低，表明凋亡的肝癌细胞中 核酸和蛋白质的含量均低于活细胞，并与药物处理时间呈一定的相关性。 结 论 ：1. 多元散射校正和标准正态变换，均是两面针产地模型鉴别 研究的理想校正方法。采用自编计算程序及现有统计软件，还可将模式 识别模型实现实时在线检测与快速鉴别样品，大大提高了鉴别速度而更 加具有应用价值。2.两面针甲醇提取物的红外图谱，能客观的反应复杂体 系中化学成分，体现其动态累积过程，并且这种方法较为客观、可靠。 3. 两面针红外指纹图谱和两面针抗肿瘤活性之间具有相关性，且生物碱 类成分在两面针抗肿瘤药效活性中发挥了重要的作用。4. 两面针氯仿提 取物能诱导肝癌细胞凋亡，其细胞凋亡过程中核酸和蛋白质的含量均低 于活细胞，并与两面针药物处理时间呈一定的相关性。 关键词：两面针；FTIR；产地鉴别模型；谱效关系；拉曼光谱 Study on fingerprint and pharmacology of active components of Zathoxylum nitidum in inhibition to liver tumor cells Abstract Objective: The dif