苯丙酮尿症致病基因检测方法优化和运用.doc

题目 苯丙酮尿症致病基因检测方法优化和运用 作者姓名 赵 帅 指导教师 吴 元 明 二级学院 医 学 院 专 业 药 学 学 号 9B093139 苯丙酮尿症致病基因检测方法优化和运用 摘 要 本研究采用聚合酶链式反应（PCR）扩增和测序方法对一个确诊的苯丙酮尿症（PKU）家系的苯丙氨酸羟化酶（PAH）及6-丙酮酰四氢蝶呤合成酶（PTPS）的基因序列热点突变位点及分布特征进行研究，优化了苯丙酮尿症致病基因检测方法。结果表明：家系中父亲和母亲是苯丙酮尿症致病基因PAH的突变携带者，儿子同时遗传了父亲和母亲的突变基因，导致其患病，是典型的PKU家系，本研究为苯丙酮尿症患者产前诊断、治疗、遗传咨询、优生优育奠定基础有重要意义。关键词：PKU；PAH；PTPS；突变热点 Phenylketonuria pathogenic gene detection method optimization and application Abstract Through the polymerase chain reaction (PCR) amplification and sequencing ，this research discussed hotspot mutation sites and distribution characteristics of the phenylalanine hydroxylase (PAH) and 6 - pyruvoyl tetrahydro pterin synthase (PTPS) genes in the phenylketonuria (PKU) family. The research optimized the detection methods of phenylketonuria disease genes. The results showed that the mother and father in the family were the carriers of PAH gene. Because of inheriting the genes of the father and mother at the same time, the son leaded to the PKU. For phenylketonuria prenatal diagnosis, therapy, genetic counseling, prenatal and postnatal care of patients, the study laid the foundation for an important significance. Keywords: PKU; PAH; PTPS; Mutation 目 录 引 言 1 1 实验材料 3 1.1 样本来源 3 1.2 主要试剂 3 1.3 主要仪器 3 2 实验方法 4 2.1 DNA 提取 4 2.2 PCR 扩增 4 2.2.1 PCR 反应体系 4 2.2.2 反应条件 4 2.3 琼脂糖凝胶电泳 5 2.3.1 琼脂糖凝胶的制备 5 2.3.2 胶板的制备 5 2.3.3 加样 5 2.3.4 电泳 6 2.3.5 观察 6 2.4 测序 6 2.5 统计学分析 6 3 实验结果 6 4讨论 8 结 论 9 参考文献 10 致 谢 11 附 录 12  言 苯丙酮尿症（phenylketonuria，PKU）是一种氨基酸代谢异常的遗传病。因其致病基因在常染色体上，所以发病几率和性别无关[1]。根据发病机制不同，学者把苯丙酮尿症分为两个类型，一类是典型 PKU，病因是苯丙氨酸羟化酶（phenylalanine hydroxylase，PAH）基因突变导致苯丙氨酸羟化酶缺乏所致，占 全部疾病的98%～99%；另一类是四氢生物喋呤缺乏症（tetrahydrobiopterindeficiency，BH4D），病因是苯丙氨酸羟化酶的辅酶，四氢生物喋呤（tetrahydrobiopterin，BH4）缺乏所致，占 1%～2%。PKU的主要临床表现为，皮肤色浅、头发细黄、虹膜淡黄色，同时尿有“发霉”臭味或鼠尿味，智力低下；而且60%患儿有脑电图异常和继发性癫痫[2]，严重者甚至可能导致死亡[3]。 苯丙酮尿症在全世界有广泛的发病几率，但也因地区及种族有明显差异，发病率总体约为 1：500－1：10000[4]。有文献报道，苯丙酮尿症发病率白种