第3讲 基因工程的酶学基础演示教学.ppt

（3）非放射性标记DNA片断的3’端 AAGCTTTT TTCGA AGCTT TTTTCGAA AAA AAA HindⅢ位点 HindⅢ位点 连接 催化非放射性标记物参入DNA片断的3’端。（生物素-11-dUTP等） 二、T4多核苷酸激酶 1. 来源 T4噬菌体的pseT基因编码。 从T4感染大肠杆菌细胞中分离出来。 多种哺乳动物细胞中也发现这种酶。 2. 功能 催化?磷酸从ATP转给双链或单链DNA或RNA的5’-OH端。 不论5’-OH端突出与否。 5’ 3’ HO- -OH 5’ 3’ HO- -OH 3’ P- -OH 5’ 3’ HO- -P 5’ ATP T4多核苷酸激酶 如果ATP的?磷酸带有32P标记，就会被转移到DNA的5’端。 但天然的DNA的5’端都是磷酸化的。 3. 多核苷酸激酶的用途 DNA 5’-OH端磷酸化、标记DNA的5’端。 5’ 3’ HO- -OH 5’ 3’ HO- -OH 3’ 32P- -OH 5’ 3’ HO- -32P 5’ (?-32P)ATP 多核苷酸激酶 3’ P- -OH 5’ 3’ HO- -P 5’ 碱性磷酸酶 （1）正向反应（forward reaction） （2）交换反应标记法 反应混合物中具有超量(?-32P)ATP和ADP时，多核苷酸激酶能催化