游离脂肪酸通过JNK途径促进胰腺中的β细胞自噬.pptVIP

游离脂肪酸通过JNK途径促进胰腺中的β细胞自噬 最近有人发现高脂饮食的人，胰岛素抵抗受到诱导，并伴随着胰腺的β细胞自噬的增加。有实验数据表明（使用β细胞自噬特异性损失的小鼠为模型）当β细胞处于胰岛素抵抗状态时，β细胞将会诱导自噬以此来保护β细胞。而另一个介导自噬的诱导物则是血清中的游离脂肪酸（FFA），在胰岛素抵抗的情况下血清中的FFA有所增加。FFAs可以促进轻链由LC3-Ⅰ转变为LC3-Ⅱ，这种转变标志着β细胞的自噬被激活。 材料和方法 1、动物 Male C57BL6 db/misty和db/db mice；Male ob/ob 和Akita mice。 所有小鼠都置于无病原体的设施中，对其分别进行12小时的光照/黑暗处理，并喂以标准的啮齿动物食物和任意量的水。通过胶原酶消化的方法分别处理小鼠的胰岛细胞，并进行免疫印迹分析。 2、细胞培养及免疫印迹分析 棕榈酸酯和油酸酯在0.1N NaOH中溶解，而后与1mM棕榈酸和1% BSA加入RPMI-1640培养基中混匀。INS-1细胞在含有10%胎牛血清的RPMI-1640补充培养基上培养。为了能够观察到LC3-Ⅱ的积累，我们在培养的最后两个小时往培养基中加入了溶酶体抑制剂Pepstatin?A（10μg/ml）和E64d（10μg/ml）。免疫活性可通过FujiLAS 3000 sys