α-醋酸萘酚酯酶.PPT

糖原染色（PAS染色）A、AML-M6（+）； B、MA（-） 【正常血细胞的染色反应 】 1.粒细胞系统 各阶段粒细胞呈阴性。 2.单核细胞系统 分化差的原始单核细胞呈阴性， 分化好的原始单核细胞呈阳性， 幼稚单核及单核细胞呈阳性，阳 性反应能被氟化钠抑制。 3.淋巴细胞系统 T淋巴细胞、非T非B淋巴细胞可呈 阳性，B淋巴细胞呈阴性。 4.其他细胞 巨核细胞、有核红细胞、浆细胞呈阴 性或弱阳性；组织细胞也可呈阳性， 但不被氟化钠抑制。 （三）α-丁酸萘酚酯酶（α-NBE）染色 【临床意义 】 与α-NAE染色的临床意义相同。 （三）α-丁酸萘酚酯酶（α-NBE）染色 【原理】 血细胞中的酸性α-醋酸萘酚酯酶在pH弱酸性(pH 5.8)条件下，可水解基质液中的α-醋酸萘酚，产生α-萘酚，进而与重氮盐六偶氮付品红形成不溶性红色沉淀，定位于细胞质内酶所在的部位。 （四）酸性α-醋酸萘酚酯酶（ANAE）染色 【正常血细胞的染色反应 】 1.单核细胞系统 单核系细胞常呈弥散型强阳性， 阳性反应可被氟化钠抑制。 2.淋巴细胞系统 T淋巴细胞呈阳性，而B淋巴细胞 多数呈阴性。 3.其他细胞 粒系细胞一般为阴性或弱阳性，但此 反应不被氟化钠抑制；红系细胞、巨 核系细胞含量较少。 （四）酸性α-醋酸萘酚酯酶（ANAE）染色 【临床意义 】 1.可粗略地鉴别T、B淋巴细胞： T淋巴细胞呈点样颗粒或块状阳性； B淋巴细胞多呈阴性。 2.鉴别其它急性白血病细胞类型同α-NAE染色。 3.多发性骨髓瘤、多毛细胞白血病细胞多为阳性；恶性组织细胞病呈强阳性；霍奇金淋巴瘤网状高铁红细胞(R-S细胞)呈阳性。 （四）酸性α-醋酸萘酚酯酶（ANAE）染色 【目的】 1．掌握骨髓铁染色的检测方法、结果分析及临床意义。 2．熟悉骨髓铁染色的原理及注意事项。 七、铁染色 【原理】 正常人骨髓中的贮存铁以铁蛋白和含铁血黄素的形式贮存， 主要存在于骨髓小粒和幼红细胞中。 骨髓中的铁在酸性环境下与亚铁氰化钾作用， 形成普鲁士蓝色的亚铁氰化铁沉淀，定位于含铁的部位。 七、铁染色 【试剂器材】 1．器材 新鲜骨髓片、显微镜、染色缸、水浴箱等。 2．试剂 （1）固定液：95％乙醇。 （2）酸性亚铁氰化钾溶液（临用前配制）。 （3）2g/L核固红-硫酸铝溶液。 七、铁染色 【操作】 1．固定 选髓粒丰富的骨髓涂片用乙醇固定10min，待干。 2．显示 浸入新配制的酸性亚铁氰化钾染液中，置37℃培养箱染色30min。蒸馏水冲洗。 3．复染 置核固红液染3～5min。流水冲洗，干后镜检。 七、铁染色 含铁蛋白的幼红细胞：铁粒幼红细胞 含铁蛋白6个以上，环核2/3以上： 环形铁粒幼红细胞 含铁蛋白的红细胞：铁粒红细胞 P83 贮存铁 贮存部位：铁主要贮存在肝、脾和骨髓中。 贮存形式： （1）铁蛋白 （细胞内铁） （2）含铁血黄素 存在于巨噬细胞等多种细胞中 （细胞外铁） 外壳 Fe2+ 中心腔 （含铁丰富） 去铁蛋白 【正常血细胞的染色反应 】 骨髓中的贮存铁分为细胞外铁和细胞内铁。 细胞外铁主要存在于骨髓小粒的巨噬细胞中，细胞内铁是指存在于中幼红细胞、晚幼红细胞及红细胞中的铁（铁粒幼红细胞、铁粒红细胞）。 七、铁染色 【正常血细胞的染色反应 】 1.细胞外铁 观察骨髓小粒中的铁，阳性结果呈弥散性、颗粒状、小珠状或块状蓝色。根据骨髓小粒中铁的存在方式及量，将细胞外铁分为（-）、（+）、（++）、（+++）、（++++）。 七、铁染色 A 骨髓细胞外铁染色 A图：细胞外铁 + ；B图：细胞外铁 ++ B 骨髓细胞外铁染色 C图：细胞外铁 +++ ；D图：细胞外铁 ++++ C D PAS染色A、CLL；B、ALL 原始、幼稚淋巴细胞均阳性，呈粗颗粒状阳性 幼稚红细胞 阴性 【原理】 偶氮偶联法（Kaplow法） 碱性磷酸酶 磷酸萘酚钠 磷酸钠+ 萘酚+重氮盐 PH9.2-9.8