分子生物学第11章节转录前的基因活化.pptVIP

图11－4 活体或离体两种方法检测MAR（1） 与核基质结合 活体方法 离体方法 图11－4 活体或离体两种方法检测MAR（2） 提取的DNA跑两个泳道，用特异的DNA探针检测其中一个泳道，看是否有特异的MAR片段 活体方法 离体方法 * 11.1 DNA水平的调控 11.2 染色质结构与基因活化 11.3 核基质附着区与基因表达 11.4 DNA甲基化在调节基因表达中的作用 11 转录前的基因活化 基因表达调控的层次 基因表达受发育阶段及环境因素的影响。生物体对基因表达的调控有许多的层次，如转录前的基因活化、转录过程、转录后的RNA加工成熟过程、翻译过程、翻译后的多肽加工过程。这些过程对于生物生长发育是非常重要的。 DNA 水平的调控 某些原生动物、线虫和甲壳类动物在个体发育中，体细胞会发生染色体丢失现象，只有将来分化形成生殖细胞的那些细胞才保持完整的基因组。 目前在高等真核生物（包括动、植物）中尚未发现类似的基因丢失现象。 基因丢失 基因丢失 马蛔虫受精卵里只有一对染色体（2n = 2），当个体发育到一定阶段后，在将分化为体细胞的那些细胞中，这对染色体破碎成许多小染色体。有的小染色体具有着丝粒，在细胞分裂中得到保留，不具有着丝粒的小染色体因为在以后的细胞分裂中不能分配到下一代细胞中而丢失，在将形成生殖细胞的那些细胞里却没有染色体破碎和丢失现象。这些基因的丢失决定了细胞的命运。 基因丢失（续） 许多原生动物细胞中（纤毛虫纲的草履虫、钟虫等）含有两种类型的核，小核和大核。通常在它们的生殖细胞中只具有一个小核，当细胞分化时，小核经历各种变化，最终结果是产生拥有一个大核和一个小核的双核细胞。小核中含有无活性的DNA，仅仅为将来产生生殖细胞贮藏遗传信息；大核中的DNA则是具有转录活性的模板。 基因丢失（续） 在对原生动物Oxytrichia的大核形成过程的研究中发现，处于生殖细胞中的小核DNA，在分化过程中被切割成长度为500～20000bp的线性片段，而且大部分DNA在形成上述线性片段的过程中被彻底降解。通过一种目前还不清楚的方式，剩下的片段能够不断复制，直到每个细胞中含有17000种不同片段的1000个拷贝为止。这些片段进一步建成大核。在这个过程中，大核所含的DNA是小核DNA的几百倍，但是丢失了一半以上的小核DNA序列。 DNA 水平的调控 基因扩增 基因扩增是指细胞内某些特定基因的拷贝数专一性地大量增加的现象，它是通过改变基因的数量而调节基因表达的一种调控方式。当发育分化或环境条件改变，使对某种基因产物的需要量剧增，单靠调节表达活性不足以满足需要时，依靠基因扩增可迅速增加基因表达产物的量。 基因扩增（续） 在两栖类和昆虫的卵母细胞中，为贮备大量核糖体以供胚胎早期发育的需要，通常专一性地扩增rRNA基因。非洲爪蟾体细胞rDNA拷贝数约500个，而卵母细胞中rDNA的拷贝数可达2百万个，以染色体外环状DNA分子的形式存在，每个环状DNA分子含2～4个甚至多达16个rRNA基因。这些rDNA约占整个卵母细胞DNA的75%。当胚胎期开始时，这些染色体外扩增的环状rDNA拷贝即失去功能并逐渐消失。 基因扩增（续） 稳定系中扩增的 dhfr 基因成簇串联在一起，位于一条染色体原来的 dhfr 基因位置上，而其同源染色体的 dhfr 基因通常不扩增。不稳定系中扩增的 dhfr 基因以双小染色体（double-minute chromosomes）的形式存在，每个双小染色体含有2～4个 dhfr 基因，双小染色体可以自主复制，但无着丝点，在有丝分裂中不能均等地分配到子细胞中去，并常常因此而丢失。 DNA 水平的调控 基因重排 基因重排是改变基因组中有关基因序列结构的一种基因表达调控方式。一个最典型的例子是人和哺乳动物在B淋巴细胞分化期间发生基因组重建，从而产生抗体的多样性，以识别和区分不同结构的抗原。 基因重排 抗体分子中最主要的IgG是由两条轻链和两条重链组成。轻链和重链由3个独立的多基因家族编码，其中两个编码轻链（κ和λ），一个编码重链。 基因重排 小鼠的κ、λ和重链的基因家族分别位于第6、12和16号染色体上。决定轻链的基因族上分别由L、V、J、C四类基因片段，L代表前导片段（leader segment），V代表可变片段（variable segment），J代表连接片段（joining segment），C代表恒定片段（constant segment）。决定重链的基因族上共有L、V、D、J、C五类基因片段，其中D代表多样性片段（diversity segment）。 基因重排 小鼠的重链和κ