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课时作业42　胚胎工程、生物技术的安全性和伦理问题 1．(2016·揭阳一中期中)Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图： (1)步骤中，在核移植前应去除卵母细胞的________，此技术属于________工程范畴。 (2)步骤中，重组胚胎培养到________期时，可从其________中分离出ES细胞。培养ES细胞时，为满足细胞代谢的需要，可在培养基中加入的天然成分是________。 (3)步骤中，在构建含有Rag2基因的表达载体时，可以根据Rag2基因的________设计引物，利用________技术扩增Rag2基因片段。并且同时用HindIII和PstI限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段，这样做的目的是：________。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有________酶的酶切位点。 (4)为检测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后的小鼠骨髓细胞的蛋白质，用________进行杂交实验。 【解析】　(1)核移植是将体细胞核移植到去核的卵母细胞中，所以实验前要去除卵母细胞的细胞核；此技术属于细胞工程的范畴。 (2)内细胞团位于囊胚中，所以重组胚胎培养到囊胚期；培养ES细胞时，为满足细胞代谢的需要，可在培养基中加入的天然成分是动物血清。 (3)设计引物要遵循碱基互补配对原则，所以根据Rag2基因的核苷酸序列进行设计；Rag2基因是利用限制酶Hind和Pst切割获得的，这样可以防止DNA片段的自身环化，同时表达载体应具有Hind和Pst的酶切位点。 (4)基因表达的产物是蛋白质，所以提取小鼠骨髓细胞的蛋白质进行抗原—抗体杂交。 【答案】　(1)细胞核　细胞 (2)囊胚　内细胞团　动物血清 (3)脱氧核苷酸序列　PCR　防止DNA片段的自身环化　Hind和Pst (4)蛋白的抗体 2．(2016·柳铁一中月考)下图为经过体外受精和胚胎分割移植培育优质奶牛的过程，请回答下列问题。 (1)A细胞是________，在进行体外受精前要对精子进行________处理。 (2)进行胚胎分割时，应选择发育到________时期的胚胎进行操作。 (3)指的是________。 (4)通过胚胎分割产生的两个或多个个体具有相同遗传性状的根本原因是________。 (5)在对囊胚阶段的胚胎进行分割时，应注意________。 (6)受体母牛必须和供体牛属于________。移植后的胚胎能在受体子宫中存活的生理基础是________。 【解析】　将获能精子与处于减数第二次分裂中期的次级卵母细胞融合即可得到受精卵，受精卵经过体外培养形成早期胚胎，为了快速繁育优良品种，可以采用胚胎分割的技术手段，即选择发育良好、形态正常的桑椹胚或囊胚进行分割，分割后产生的个体因为所含的遗传物质相同，所以性状表现很相似。在对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要注意将内细胞团均等分割，以免影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。大量的研究已经证明，受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应，这为胚胎在受体内的存活提供了可能。 【答案】　(1)(次级)卵母细胞　获能 (2)桑椹胚或囊胚 (3)囊胚腔 (4)具有相同的遗传物质 (5)胚胎分割要将内细胞团均等分割，以免影响胚胎的恢复和进一步发育 (6)同一物种　受体子宫对外来胚胎不发生排斥反应 3．(2016·荆州中学月考)自然条件下，哺乳动物不发生孤雌生殖。2014年3月，云南农大科研团队把猪卵母细胞进行人为的孤雌激活处理，使其发育成胚胎，移植到代孕母猪体内，获得世界上第一批成活的孤雌生殖克隆猪。这种克隆猪不同于核移植获得的克隆猪，现将两种技术进行比较。 (1)图中过程是获得孤雌生殖克隆猪的技术流程，那么获得核移植克隆猪的技术流程是过程________(填序号)。 (2)孤雌生殖克隆猪仍然是二倍体生物，但由于缺失________方亲本基因，导致其生长发育中出现多种问题，给研究者提供了很好的材料。 (3)孤雌激活处理其实质是要激活卵母细胞________，使其发育成早期胚胎，得到克隆猪。 (4)体细胞核移植技术中也会用到卵母细胞，需要选择________________时期的卵母细胞，并用微型吸管吸出________。 (5)早期胚胎移植时，必需移植到同种________ 的其他雌性动物子宫中，才可能移植成功。 (6)可以从良种不同的克隆猪中提取mRNA进行研究，也可通过________方法得到多种cDNA, 并通过________技术扩增产物。 【解析】　(1)分析过程图可知，获得核移植克隆猪的技术流程是过程核移植、早期胚胎培养、胚胎移植、胚胎发育。 (2)分析过程图可知，孤雌生殖克隆猪是二倍体