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第七章 生物固氮 第一节 生物固氮作用的意义 生物固氮作用 分子态N在部分微生物体内经固氮酶催化还原为NH3的生物学过程。 意义 生物固N作用形成的化合态N是土壤化合态N的一个重要来源； 直接提高作物能吸收的N素营养； 降低农本。 第二节 固氮微生物和固N体系 一、固氮微生物 50个属100多种，包括细菌、放线菌、蓝细菌等原核微生物 二、 固氮体系 自生固N体系 共生固N体系 联合固N体系 （1）自生固N体系 固氮微生物在其独自生活过程中，将分子态N还原为氨，由这类固N微生物建立的体系。 主要属种 专性好气 专性厌气 兼性厌气 固氮菌属，圆褐固氮菌，氧化亚铁硫杆菌 固氮蓝细菌（鱼腥藻） 芽孢梭菌， 光合固氮细菌（绿色硫杆菌） 多粘芽孢杆菌，肺炎克氏杆菌，阴沟肠杆菌，红螺菌 （2）共生固N体系 固氮微生物必须与相应的植物建立共生体系，才能固定分子态N为氨，由这类共生固氮微生物建立的体系。 常见共生体 根瘤共生体 地衣共生体 苔藓共生体 根瘤菌与豆科植物； 弗兰克氏菌（放线菌）与非豆科植物（木麻黄，杨梅，沙枣） （3）联合固N体系 雀稗固N菌必须生活在点状雀稗根的粘质鞘套内； 阴沟肠杆菌、肺炎克氏菌必须生活在厌气条件下的根际环境中，如水稻根际。 介于自生固氮体系和共生固氮体系之间的中间类型，即这类固N微生物能独自固N，固N活性较低；当它与相应的植物共栖后，表现较高的固N活性。 联合固N微生物必须生活在一定的植物组织内或组织外，如： 第三节 生物固氮作用的机理 N2＋8e－＋8H＋＋28ATP NH3＋H2＋28ADP＋28Pi 固N酶 厌气 一、 固N酶的特性 组分 性质 Ⅰ——钼铁蛋白，其中钼原子构成酶活中心，传递电子和质子； Ⅱ——铁蛋白 固氮酶两个组分具互补性，来源于不同固氮微生物的固氮酶组分可以组合表现酶活性，其强弱视亲缘关系的远近； 氧的敏感性，遇氧不可逆变性失活； 具底物的多样性，除能将分子态N还原为氨外，还能催化许多底物的还原。 低Eh（-490mv）条件下进行固N作用。 HC≡CH→H2C=CH2 H+→H2 N2O→N2 组分 性质 一、 固N酶的特性 二、固N酶催化反应的条件 1、催化反应所需的能量和电子 还原1分子N2为2NH3，共需28个ATP，其中 9个ATP用于破键， 12个ATP用于破键过程中能量的消耗， 7个ATP用于1分子H2的形成。 好气性固N微生物——氧化磷酸化（底物水平，电子传递磷酸化） 厌气性固N微生物——底物水平磷酸化 光合固N微生物——光合磷酸化 （1）ATP的来源 二、固N酶催化反应的条件 呼吸、发酵或光合作用形成的还原力，如NAD(P)＋H＋，H2，丙酮酸（生理性电子供体），这类电子供体提供的电子须由电子载体携带，如铁氧还蛋白、黄素氧还蛋白。 非生理性电子供体：是一类强还原性的化学物质，如连二亚硫酸钠。 （2）电子的来源：由电子供体提供 电子：还原1分子N2为2NH3，共需8个电子，其中6个用于N2的还原，2个电子用于H+的还原。 2、固N酶催化反应的抑制 （1）氢的抑制 H＋是固N作用的专一性竞争抑制剂 原因： H+和N2在固氮酶上的结合位点相同； 竞争能量和电子。 在分子态N的还原过程中总是伴有H2的释放， 这一现象称为放氢现象： 2H+ 固N酶 H2 H2 吸氢酶 O2 2H+＋2e－ 二、固N酶催化反应的条件 （2）氧的抑制 固N酶催化反应的抑制 氧的敏感性 O2使电子载体氧化，影响电子传递； O2使固氮酶某些蛋白氧化变性，产生不可逆的失活。 原因： 好气性固氮微生物的防氧保护 共生固氮菌——根瘤菌的防氧保护机制：豆血红蛋白（L6） 存在于根瘤菌细胞的泡囊，类菌体细胞的周围； L6既可以加氧状态存在，又可以脱氧存在，使L6成为氧的调节剂。 L6O2?L6＋O2 豆血红蛋白是共生体根瘤形成过程中由根瘤菌和植物的基因共同形成的，其中根瘤菌产血红素，植物产球蛋白,但须由根瘤菌诱导才能产生。 L6O2可以高流速低浓度的氧流向类菌体，提供生长所需O2。这样既保证类菌体生长，又保证类菌体细胞内的固氮酶不受高浓度氧的抑制。 好气性自生固氮菌的防氧保护机制 呼吸保护作用 构象保护作用 当体内含有高浓度O2时，通过改变呼吸途径，消耗大量底物同时也就消耗了大量的O2。 将固氮酶可逆的结合处Fe-S蛋白上形成一种蛋白复合体，该复合体能增加对氧的稳定性，当体内高浓度O2消耗后，这种蛋白复合体自行解体，固氮酶恢复其固氮的催化作用。 通过产生过氧化物歧化酶，对过氧化物具解毒作用，保护固氮酶免受过氧化物的抑制。 好气性固氮蓝细菌的防氧保护机制 异形胞——胞壁厚，防止O2、水及其他化合物的渗透。 异形胞中央部分的类囊体膜消失，使其光合系统Ⅱ失活（光合系统Ⅱ 主要是光解水产生H