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鸡屎藤组培计划 ０９园艺技术班　　第六实验小组 一．实验目的：学习配置培养基及在人工配置的培养基中将离体的植物细胞进行培养的。 二．实验原理：植物组织培养是应用无菌操作的方法培养离体的植物器官或组织，甚至单个植物的过程。如果组织培养使用的材料是带菌的，在接种前就必须选择合适的消毒剂对植物体进行表面消毒，获得 无菌的材料再进行组织培养。由于植物细胞具有全能性，外植体在合适的培养基上，通过脱分化，形成一种能迅速增值的无特定结构和功能的细胞团——愈伤组织。而植物生长调节剂如6-ＢＡ等是诱导外植体形成愈伤组织的重要影响因素。（实验表明：叶片最易诱导产生愈伤组织，最佳激素配比为MS+6-BA 1．0 mg／L+NAA 0．5 mg／L，诱导率可达100％。） 三．实验材料，剂及器材 (1)材料：鸡屎藤叶片 (2)试剂： MS培养基，ＮＡＡ，６－ＢＡ，琼脂，蔗糖 (3)仪器与设备：电子天平，高压灭菌锅，单人双面超净工作台，全温振荡培养箱，光照培养箱,NAA和 6-ＢＡ。 四．实验步骤 （１）配置培养基： 1.0 0.3 1.0 0.5 1.0 0.7 1.0 0.9 每配置１Ｌ培养基加入8 g琼脂和30 g蔗糖，调pH至5．8，在121℃，1．05×105Pa压力下灭菌20min。 (2)外植体处理及灭菌：叶片用自来水反复冲洗干净后，用体积分数为70％的乙醇浸泡30 S，无菌水冲洗2次。用0．1％ 的HgC1：进行表面灭菌处理，所有材料灭菌时间均设6、8、1O、12min四个处理，无菌水冲洗5～6次。 （3）外植体接种：将叶片切成0．5 cm×0．5 cm左右的小块，无菌接种至培养基上。根据接种8 d后外植体变化情况确定最佳灭菌处理时间。确定最佳灭菌时间后，叶片按照最佳灭菌时间处理。接种于含有不同植物激素的MS培养基中，恒温培养箱中(25-4-0．5)oC培养，愈伤组织诱导与增殖过程中光照强度1000～1500 lx，光照时间12 h／d。统计分析各种诱导培养基的愈伤组织诱导率及愈伤组织生长情况。 参考文献：赵俊，吴虹丽，马林.鸡屎藤愈伤组织诱导及细胞悬浮培养研究.南方农业.2010年第五期.