基因工程技术讲解.pptVIP

基因工程技术;Jackson, Symons, and Berg (1972) – generated first recombinant DNA molecules Cohen and Boyer (1973) – produced first plasmid vector capable of being replicated within a bacterial host;定义：;应用：;基因工程基本步骤：;基因工程流程示意图;构建重组分子（连接）;目的基因片段来源：;PCR：;片断的回收与纯化;载体：;克隆载体(cloning vector) 用于在受体细胞中进行目的基因扩增的载体。一般具有较低的分子量、较高的拷贝数和松弛型复制子。主要由细菌质粒或与其它质粒、噬菌体及真核生物病毒的DNA重组构建（pBR322）。 表达载体(expression vector) 使目的基因在宿主细胞中得以表达的载体。可将重组体DNA导入适合的受体细胞，使所载荷的目的基因能够复制、转录和翻译（pcDNA3）。;穿梭载体(shuttIe vector);质粒载体;克隆载体: pBR322 ;;TA 克隆;TOPO-TA;原核 His-tag: pQE系列(Qiagen), pET22(Novagen) GST-tag: pGEX系列(Pharmacia);pcDNA 3系列 (Invitrogen)，;pFLAG-CMV系列(Sigma);DNA分子的体外连接：方法 ;两种情况：;碱性磷酸酶处理：;平头末端：;Eco RⅠ;连接策略：;连接浓度： ;连接反应：;连接酶：两种;其他酶：末端修饰酶;重组子导入受体细胞：;重组子导入受体细胞：途径;转化;感受态菌制备;氯化钙法：原理;重组子的筛选：;插入失活：;α互补现象：蓝白斑筛选; 42℃90s,+900ul LB,37 ℃45min ;阳性克隆的鉴定：;碱裂解法;试剂作用：;Protocol:;初步鉴定:;后续：