贝克曼流式细胞仪原理及软件介绍.pptVIP

光路 - 滤片特性 长通滤片 – 允许长于设定波长的光通过 短通滤片 – 允许短于设定波长的光通过 带通滤片 – 允许一定带宽的波长通过 光路 - 滤片特性 当以 45o 角放置滤片时,该滤片可以通过一定波长的光,同时也可以阻断并折射该波长以下的光 这种方式的滤片称为二向色性滤片( dichroic filter) 滤片 带通滤片 BAND PASS (BP) 只允许某些波长的光通过 二向色性滤片 DICHROIC FILTER 一定波长以上通过，该波长以下折射 630 nm BandPass Filter Transmitted Light White Light Source 620 -640 nm Light Dichroic Filter/Mirror at 45 deg Reflected light Transmitted Light Light Source Optics - Detectors Photomultiplier tube (PMT) 将光学信号转变为电脉冲(数字数据)信号 不同的脉冲信号被转换成数字通道(CHANNEL)的过程 Single Parameter Histogram: Count vs MFI Single Parameter Histogram Dual Parameter Histograms Dual Parameter Histograms 分析系统 以FC500机型的CXP软件介绍 * * Beckman Coulter是全球著名的流式细胞仪生产厂商，机型齐全，从分析到分选，从科研到临床，充分满足生命科学领域使用者的需求。 * Data results with Q-Prep/Quick Spin: PerCP and APC demonstrate significantly lower MFI than ECD, PC5, and PE. 流式细胞仪FLOW CYTOMETER 原理及软件介绍 Beckman Coulter流式细胞仪发展史 1947年Wallace Coulter发明了库尔特原理，用于血细胞分析 1953年推出了世界上第一台流式细胞分析仪Coulter Counter Model A 1972年推出世界上第一台激光流式细胞仪EPICS II 1975年研制出世界上第一台带计算机的流式细胞仪 1997年推出世界上第一台单激光四色数字化流式细胞仪EPICS XL/MCL 2000年首先将高精度数字化颜色补偿技术ADC（Advanced Digital Compensation）应用于流式平台，引领流式进入全新的全矩阵补偿、全自动补偿和脱机补偿时代 2003年推出世界上第一台单激光五色的流式细胞仪FC500/MCL，2005年升级为FC500/MPL 2006年推出世界上第一台具有EV参数同时进行无成本绝对计数的多功能细胞分析系统Quanta SC， 将流式细胞术与库尔特原理完美结合，2007年推出MPL进样系统 2007年收购Dako公司的Moflo和Cyan，使Beckman公司成为高端流式市场的领导者 2009年，推出世界是第一台三激光十色的分析型流式细胞仪Gallios/Navios EPICS XL-ADC QUANTA SC Cytomics FC500 Beckman Coulter Celllab Family MoFlo XDP Gallios/Navios Cyan ADP FC500硬件 What is flow cytometry? 流式细胞术是单个细胞/颗粒流过检测装置过程中，检测到的物理和/或化学的特性。 Howard Shapiro, Practical Flow Cytometry, 3rd Edition 分类 分析型：只能分析用，液流进入废液筒 分选型：回收目标细胞，用于后续实验。要求管道绝对无菌。 基本原理 流路（液流系统） 流动室 鞘液SHEATH 样本流SAMPLE 单细胞悬液5*105~1*106个/ml 光路（光学系统） 光源 滤片 光电倍增管PMT HV 电路（电路系统） 放大电路HV及GAIN 增益 A/D转换 分析系统：计算机 流路构造 流 路 单细胞悬液 大多数仪器是在50-300 μm 大小的孔径中,将细胞悬液注射进入鞘液中 这一过程,成为流体动力学聚焦 FLOW CELL Injector Tip Fluorescence signals Focused laser beam Sheath fluid 光路构造 光 路 光源 检测信号 散射光信号 FS: 前向