实验中医学分子生物学方法及其在中医研究中的应用.pptVIP

* （一）分子生物学技术在中医基础理论研究中的应用 1．肾本质的研究 2．中医药延缓衰老的研究 3．瘀血和活血化瘀治法的研究 4．治则治法研究 （二）分子生物学技术在中医临床上的应用 中药治疗β-地中海贫血机制的研究。 砷剂治疗急性早幼粒细胞白血病机制的研究。 * （三）分子生物学技术在针灸研究中的应用 针刺镇痛的机制研究。 针灸治病的机制研究。 （四）分子生物技术在方药研究中的应用 1．在方剂研究中的应用 2．在中药研究中的应用 （1）应用分子生物学技术进行中药品种鉴定与质量评价。 （2）应用分子生物学技术进行中药材药效评价与筛选。 （3）应用分子生物学技术改良中药品质，提高药品质量。 * 三、展望 在20世纪90年代初，在申报中医药实验项目研究中还很少见到采用分子生物学技术，然而仅仅过去了10年，到了本世纪初，中医药实验项目已普遍采用了分子生物学技术，并且有些技术是跟踪国外最新发展起来的前沿技术。经过多年的探索，分子生物学技术在中医药研究中的作用愈来愈突出，广泛从基因、分子水平来认识中医药的奥秘，使中医药研究方法与手段融入了当今世界医学研究的主流。可以预计，分子生物学技术在中医实验研究中将发挥愈来愈重要的作用。 * 传统的、经典的研究方法已满足不了实验中医学认识生命现象的需要，中医药对基因转录、表达的调控作用已一再被实验所证实，进一步的研究必将深入到中医药对某些目的基因启动子的调控、对核酸和蛋白的加工和修饰及信号分子的传递等层次上。中医实验将在不断吸收最新的研究方法、最新的研究技术的过程中，逐步深化对中医药的认识，为现代生命科学做出新的贡献。 分子生物学将中医学基础、临床和产业紧密联系在一起，运用分子生物学理论和技术阐明中医药理论的关键问题，揭示一些难治性疾病的机制，将迅速为临床诊断治疗提供指导，促进药物研发，使中医药为人类健康发挥越来越显著的作用。 * * * * * （七）基因表达谱芯片和DNA阵列技术 这类技术主要用于检测目标组织多RNA转录的差异。主要有两种检测方式： 1．基因芯片（Micro array） 什么叫基因芯片？派什么用处？基因芯片与Northern blot的目的有何异同？ 基因芯片又称基因表达谱芯片，特点是把成千上万个基因高密度地点涂或压印在包被的载体上，一次检测可多达数万个基因。该方法进而发展出外显子芯片（Exon Array），可以进一步观察某基因各外显子剪接的差异。 * * * 2．cDNA阵列（cDNA Array） 该技术把几十至上万个基因点涂在96孔板大小的硝酸纤维素膜上，一次检测可多达上万个基因。 实验时，将用荧光或同位素标记的待测核酸样品与以上Array进行杂交，杂交后用高分辨率的激光扫描仪检测荧光标记，再用数字成像软件分析每个点发出的信号，即可获得基因表达谱；或放射自显影（适用于同位素标记的探针）。用此方法可将实验样品与对照组的基因表达谱进行差异分析。 * （八）标记DNA或RNA探针 什么叫探针？探针是用来做什么的？ 探针：探针是一小段单链DNA或者RNA片段（大约是20到500bp），用于检测与其互补的核酸序列。 标记探针：把已知DNA或RNA作为模板，用一些特定的方法把一些易于检测的化学物质标记到合成的另一条核酸链上，以便检测之用。 用途：通过杂交，使探针与被检测的样本DNA或RNA结合，使痕量的DNA或RNA得以显示出来。常用的标记放射性同位素有32P和35S，能用于检测极微量的靶DNA或RNA；非放射性标记物有生物素、地高辛、荧光素等。 * （九）cDNA文库构建 cDNA文库：以mRNA为模板，经反转录酶催化，在体外反转录成cDNA，与适当的载体（常用噬菌体或质粒载体）连接后转化受体菌，则每个细菌含有一段cDNA，并能繁殖扩增，这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。 DNA文库：某一特定来源DNA通过细胞－DNA克隆技术构建呈含有所用DNA片段的重组DNA分子，并转化至细菌内，构成DNA文库。 * cDNA文库的构建方法： 把目的细胞所有的带聚腺苷酸（poly A）的mRNA经酶促反应转变为双链DNA，进而将此DNA插入原核或真核载体，扩增，回收扩增了的DNA，这一工作称之为构建cDNA文库。构建文库对RNA质量要求高，既要保证不污染，又要保证mRNA的完整性。构建的